| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 本文英文常用缩写词 | 第7-13页 |
| 1 前言 | 第13-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 样品 | 第18页 |
| 2.1.2 SPF鸡胚 | 第18页 |
| 2.1.3 标准阳性血清和抗原 | 第18页 |
| 2.1.4 菌种和克隆载体 | 第18页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.6 毒株和弱毒疫苗 | 第18-19页 |
| 2.1.7 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.8 其他相关试剂和主要溶液的配置 | 第19-20页 |
| 2.1.9 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-34页 |
| 2.2.1 样品的处理 | 第20-21页 |
| 2.2.1.1 组织和拭子样品处理 | 第20-21页 |
| 2.2.1.2 番鸭血清样品处理 | 第21页 |
| 2.2.2 血清样品H9抗体效价测定 | 第21-22页 |
| 2.2.2.1 四单位抗原的制备 | 第21页 |
| 2.2.2.2 血凝抑制试验（HI） | 第21-22页 |
| 2.2.3 病毒的分离 | 第22页 |
| 2.2.4 病毒的鉴定 | 第22-24页 |
| 2.2.4.1 红细胞凝集试验 | 第22页 |
| 2.2.4.2 中和试验 | 第22-23页 |
| 2.2.4.3 RT-PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 病毒的HA基因全长测定及分析 | 第24-28页 |
| 2.2.5.1 引物设计与合成 | 第24页 |
| 2.2.5.2 病毒RNA的抽提 | 第24页 |
| 2.2.5.3 HA全长RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.5.4 HA基因的克隆和测序 | 第25-27页 |
| 2.2.5.5 HA基因的c DNA序列及其推导的氨基酸序列分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 H9N2毒株的选取和纯化 | 第28页 |
| 2.2.7 毒株的扩繁和鸡胚半数感染量（EID_(50)）的测定 | 第28页 |
| 2.2.8 毒株的静脉致病指数（IVPI）的测定 | 第28-29页 |
| 2.2.9 不同宿主来源的H9N2毒株对雏番鸭致病性 | 第29页 |
| 2.2.9.1 动物实验 | 第29页 |
| 2.2.9.2 样品的采集和处理 | 第29页 |
| 2.2.10 H9N2禽流感不同的人工感染途径对番鸭的致病性 | 第29-32页 |
| 2.2.10.1 动物实验 | 第29-30页 |
| 2.2.10.2 样品的采集和处理 | 第30页 |
| 2.2.10.3 组织样品的核酸提取以及细胞因子m RNA的c DNA合成 | 第30-31页 |
| 2.2.10.4 组织器官中细胞因子m RNA表达量的动态变化 | 第31-32页 |
| 2.2.11 H9N2禽流感和RA协同感染对雏番鸭的致病性 | 第32-33页 |
| 2.2.11.1 RA的复苏和培养 | 第32-33页 |
| 2.2.11.2 动物实验 | 第33页 |
| 2.2.11.3 临床症状观察与数据统计 | 第33页 |
| 2.2.12 H9N2禽流感感染对雏番疫苗免疫效果的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.12.1 动物实验 | 第33页 |
| 2.2.12.2 样品采集与处理 | 第33-34页 |
| 2.2.13 H9N2禽流感对产蛋番鸭生产性能的影响 | 第34页 |
| 2.2.13.1 动物实验 | 第34页 |
| 2.2.13.2 样品的采集和处理 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-60页 |
| 3.1 番鸭H9亚型禽流感血清学调查结果 | 第34-35页 |
| 3.2 病毒分离和鉴定 | 第35-37页 |
| 3.2.1 病毒分离和血清学鉴定 | 第35页 |
| 3.2.2 HA基因和NA基因RT-PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 H9N2亚型禽流感毒株分离结果 | 第36-37页 |
| 3.3 H9N2分离株的HA基因的克隆测序和序列分析 | 第37-43页 |
| 3.3.1 HA基因RT-PCR扩增 | 第37-38页 |
| 3.3.2 HA基因核苷酸序列拼接和整理 | 第38-39页 |
| 3.3.3 HA基因同源性分析和系统发育树构建 | 第39-40页 |
| 3.3.4 分离株HA蛋白质裂解为点分析 | 第40页 |
| 3.3.5 HA蛋白质受体位点分析 | 第40-41页 |
| 3.3.6 HA蛋白质N-糖基化位点 | 第41-43页 |
| 3.4 毒株的纯化 | 第43页 |
| 3.5 鸡胚半数感染量（EID_(50)）和静脉致病指数（IVPI）的测定 | 第43-44页 |
| 3.6 不同来源的H9N2毒株对雏番鸭致病性结果 | 第44-45页 |
| 3.6.1 临床观察结果 | 第44页 |
| 3.6.2 雏番鸭排毒量以及排毒规律的测定 | 第44页 |
| 3.6.3 抗体变化情况 | 第44-45页 |
| 3.7 不同人工感染途径对番鸭的致病性结果 | 第45-55页 |
| 3.7.1 临床观察结果 | 第45页 |
| 3.7.2 攻毒鸭拭子排毒率测定 | 第45-46页 |
| 3.7.3 同居鸭拭子排毒率测定 | 第46-47页 |
| 3.7.4 抗体变化情况 | 第47-48页 |
| 3.7.5 病理切片观察 | 第48-50页 |
| 3.7.6 组织器官中细胞因子m RNA表达量的变化 | 第50-55页 |
| 3.7.6.1 脾脏中INF-γm RNA表达量变化 | 第50-51页 |
| 3.7.6.2 各组织器官中MHC和TLR-7 的m RNA表达量变化 | 第51-53页 |
| 3.7.6.3 组织器官的IL-18、IL-2、IL-6、IL-8m RNA表达量变化 | 第53-55页 |
| 3.8 H9N2禽流感和RA的协同感染结果 | 第55-56页 |
| 3.8.1 RA细菌学检查结果与培养 | 第55页 |
| 3.8.2 症状观察和死亡率统计结果 | 第55-56页 |
| 3.9 H9N2禽流感感染对疫苗免疫的影响 | 第56-59页 |
| 3.9.1 H9N2禽流感感染对番鸭细小弱毒苗免疫的影响 | 第56-58页 |
| 3.9.2 H9N2禽流感感染对番鸭呼肠孤弱毒苗免疫的影响 | 第58-59页 |
| 3.10 H9N2禽流感对产蛋番鸭生产性能的影响 | 第59-60页 |
| 3.10.1 产蛋番鸭排毒情况 | 第59页 |
| 3.10.2 产蛋番鸭攻毒后产蛋率变化 | 第59页 |
| 3.10.3 抗体变化情况 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-65页 |
| 4.1 H9N2亚型禽流感不同宿主之间流行情况 | 第60-61页 |
| 4.2 分离株HA基因的核苷酸序列分析 | 第61-62页 |
| 4.3 分离株的HA蛋白质位点变化分析 | 第62-63页 |
| 4.4 H9N2亚型禽流感病毒对番鸭的致病性 | 第63-65页 |
| 5 结论 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
