| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 猪胸膜肺炎的病原学与流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.1 病原学 | 第12页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第12-13页 |
| 1.2 胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子以及致病机理的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 主要毒力因子的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.2 致病机理 | 第18页 |
| 1.3 猪胸膜肺炎疫苗研究进展 | 第18-23页 |
| 1.3.1 灭活疫苗 | 第18-19页 |
| 1.3.2 Ghosts疫苗 | 第19-20页 |
| 1.3.3 亚单位疫苗 | 第20-21页 |
| 1.3.4 核酸疫苗 | 第21页 |
| 1.3.5 口服疫苗 | 第21页 |
| 1.3.6 减毒活疫苗 | 第21-23页 |
| 1.4 细菌脂蛋白(Lipoprotein,Lpp)研究进展 | 第23-28页 |
| 第2章 材料与方法 | 第28-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-34页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、引物和培养条件 | 第28-30页 |
| 2.1.2 培养基和抗生素 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要试剂和溶液 | 第31-33页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-45页 |
| 2.2.1 APP脂蛋白的生物信息学预测 | 第34-35页 |
| 2.2.2 Lip40蛋白的生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.2.3 rLip40蛋白的表达、纯化和Western blot分析 | 第35-39页 |
| 2.2.4 兔抗rLip40蛋白多克隆抗体的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.5 Lip40蛋白的亚细胞定位 | 第40-41页 |
| 2.2.6 Lip40蛋白差异性表达分析 | 第41-42页 |
| 2.2.7 rLip40蛋白对小鼠的免疫保护实验 | 第42页 |
| 2.2.8 lip40基因回复突变株C△lip40的构建及鉴定分析 | 第42-45页 |
| 第3章 结果与分析 | 第45-63页 |
| 3.1 生物信息学分析结果 | 第45-48页 |
| 3.1.1 APP中60个脂蛋白的预测 | 第45页 |
| 3.1.2 Lip40蛋白的生物信息学分析 | 第45-48页 |
| 3.2 rLip40蛋白的表达、纯化和Western blot分析 | 第48-50页 |
| 3.2.1 lip40基因的扩增以及重组表达质粒的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.2 rLip40蛋白的表达、纯化和Western blot分析 | 第49-50页 |
| 3.3 兔抗rLip40蛋白多克隆抗体的制备 | 第50-52页 |
| 3.4 Lip40蛋白的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| 3.4 Lip40蛋白的差异表达分析 | 第53-55页 |
| 3.4.1 不同应激条件对lip40基因转录水平的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.2 不同应激条件下Lip40蛋白在APP外膜中表达水平的变化 | 第54-55页 |
| 3.5 rLip40蛋白对小鼠的免疫保护实验 | 第55-58页 |
| 3.5.1 免疫后小鼠血清中特异性抗体效价的检测 | 第55-56页 |
| 3.5.2 攻毒后小鼠的临床症状以及存活率 | 第56-58页 |
| 3.6 lip40基因回复突变株C△lip40的构建及鉴定分析 | 第58-63页 |
| 3.6.1 lip40基因的扩增以及穿梭质粒pJFF-lip40的构建 | 第58-59页 |
| 3.6.2 回复突变株C△lip40的筛选与初步鉴定 | 第59页 |
| 3.6.3 C△lip40的遗传稳定性 | 第59-61页 |
| 3.6.4 C△lip40体外生长能力分析 | 第61页 |
| 3.6.5 C△lip40的氯霉素抗性分析 | 第61-63页 |
| 第4章 讨论 | 第63-66页 |
| 4.1 脂蛋白的致病性 | 第63页 |
| 4.2 Lip40蛋白中的串联重复序列 | 第63-64页 |
| 4.3 Lip40蛋白可能是APP的毒力因子 | 第64页 |
| 4.4 Lip40蛋白可作为APP疫苗研发的候选蛋白 | 第64-65页 |
| 4.5 回复突变株C△lip40构建的生物学意义 | 第65-66页 |
| 第5章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
| 在校期间发表的和待发表的文章 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
