| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 旋毛虫简介 | 第15页 |
| 1.1.1 旋毛虫和旋毛虫病 | 第15页 |
| 1.1.2 旋毛虫生活史 | 第15页 |
| 1.2 谷氨酰胺概述 | 第15-17页 |
| 1.2.1 谷氨酰胺的合成代谢 | 第16页 |
| 1.2.2 谷氨酰胺的分解代谢 | 第16页 |
| 1.2.3 谷氨酰胺的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 谷氨酰胺酶概述 | 第17-18页 |
| 1.3.1 肾型谷氨酰胺酶 | 第17页 |
| 1.3.2 肝型谷氨酰胺酶 | 第17-18页 |
| 1.4 大肠杆菌抗酸机制研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4.1 谷氨酸依赖型抗酸系统 | 第18-19页 |
| 1.4.2 精氨酸依赖型抗酸系统 | 第19页 |
| 1.4.3 谷氨酰胺依赖型抗酸系统 | 第19页 |
| 1.4.4 其他氨基酸的抗酸机制 | 第19-20页 |
| 1.4.5 伴侣蛋白的抗酸作用 | 第20页 |
| 1.5 旋毛虫抗酸机制的探讨 | 第20页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.4 旋毛虫虫种 | 第23页 |
| 2.1.5 主要应用软件 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 TsGLS的基因克隆 | 第24-27页 |
| 2.2.2 TsGLS序列的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.2.3 TsGLS的稀有密码子分析 | 第28页 |
| 2.2.4 重组表达质粒的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.5 TsGLS重组蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.2.6 TsGLS蛋白的抗原性检测 | 第30-31页 |
| 2.2.7 TsGLS蛋白免疫荧光定位 | 第31-32页 |
| 2.2.8 酸性条件对TsGLS mRNA表达水平的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.9 胃蛋白酶对TsGLS mRNA表达水平的影响 | 第33-35页 |
| 3 结果 | 第35-48页 |
| 3.1 Ts GLS基因克隆结果 | 第35-36页 |
| 3.1.1 TsGLS的扩增 | 第35页 |
| 3.1.2 重组克隆质粒p MD18-T-Ts GLS的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2 扩增序列TsGLS的生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 3.2.1 TsGLS序列翻译比对 | 第36页 |
| 3.2.2 TsGLS基本理化性质分析 | 第36-37页 |
| 3.2.3 TsGLS跨膜区预测 | 第37-38页 |
| 3.2.4 TsGLS信号肽分析 | 第38页 |
| 3.2.5 不同来源GLS基因序列分析 | 第38-39页 |
| 3.3 GLS基因序列的稀有密码子预测 | 第39页 |
| 3.4 重组表达质粒p ET-32a-TsGLS的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4.1 质粒PCR鉴定 | 第39页 |
| 3.4.2 质粒双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5 诱导表达结果 | 第40-42页 |
| 3.5.1 rTsGLS SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| 3.5.2 IPTG诱导浓度的优化 | 第41页 |
| 3.5.3 rTsGLS的可溶性分析及纯化 | 第41-42页 |
| 3.6 多克隆抗体效价的测定 | 第42页 |
| 3.7 Western blot分析 | 第42页 |
| 3.8 TsGLS蛋白免疫荧光定位 | 第42-43页 |
| 3.9 酸性条件对TsGLS m RNA表达水平的影响 | 第43-46页 |
| 3.9.1 RT-Ts GLS基因和内参RT-TsGAPDH基因片段的扩增 | 第43-44页 |
| 3.9.2 标准曲线的建立 | 第44-45页 |
| 3.9.3 不同p H对TsGLS m RNA表达水平的影响 | 第45页 |
| 3.9.4 不同培养时间对TsGLS m RNA表达水平的影响 | 第45-46页 |
| 3.10 胃蛋白酶对TsGLS mRNA表达水平的影响 | 第46-48页 |
| 3.10.1 荧光定量PCR分析 | 第46-47页 |
| 3.10.2 免疫荧光信号分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 4.1 旋毛虫GLS基因的原核表达 | 第48页 |
| 4.2 TsGLS蛋白荧光免疫定位 | 第48-49页 |
| 4.3 酸性条件对旋毛虫肌幼虫GLS基因mRNA表达量的影响 | 第49页 |
| 4.4 本实验创新之处 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
