| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第11-24页 |
| 1.1 乙烯与果实成熟 | 第11-12页 |
| 1.2 乙烯的生物合成 | 第12-19页 |
| 1.2.1 SAM合成酶基因研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.2 ACC合成酶基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.3 ACC氧化酶基因研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3 生物信息学 | 第19-20页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9基因组编辑技术 | 第20-23页 |
| 1.4.1 基因组编辑技术 | 第20-21页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas系统的历史及结构 | 第21-22页 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas系统的作用机制 | 第22页 |
| 1.4.4 人工CRISRP/Cas9系统 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 甜瓜全基因组中ACO基因家族成员的鉴定 | 第25页 |
| 2.2.2 甜瓜ACO家族氨基酸同源性、系统发生、保守基序分析 | 第25页 |
| 2.2.3 转录组测序及数据处理 | 第25-26页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR验证 | 第26-27页 |
| 2.2.5 CmACO7、CmACO8基因全长cDNA克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.6 CmACO7、CmACO8基因超表达载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.7 CmACO7、CmACO8基因CRISPR/Cas9系统载体构建 | 第31-35页 |
| 2.2.8 甜瓜的遗传转化 | 第35-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-58页 |
| 3.1 甜瓜ACO基因家族成员 | 第38页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第38-43页 |
| 3.2.1 甜瓜ACO家族氨基酸同源性、系统发生分析 | 第38-40页 |
| 3.2.2 甜瓜ACO蛋白保守基序分析 | 第40-43页 |
| 3.3 转录组数据分析 | 第43-44页 |
| 3.4 qRT-PCR验证 | 第44-45页 |
| 3.5 CmACO7、CmACO8基因全长cDNA克隆 | 第45-52页 |
| 3.5.1 甜瓜总RNA提取 | 第45页 |
| 3.5.2 RT-PCR扩增 | 第45-46页 |
| 3.5.3 重组子筛选 | 第46页 |
| 3.5.4 菌体PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.5.5 CmACO7、CmACO8序列分析 | 第47-49页 |
| 3.5.6 CmACO7、CmACO8基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第49-52页 |
| 3.6 超表达载体构建 | 第52-53页 |
| 3.6.1 重组子筛选 | 第52页 |
| 3.6.2 菌体PCR检测 | 第52-53页 |
| 3.6.3 酶切鉴定 | 第53页 |
| 3.7 CmACO7、CmACO8基因CRISPR/Cas9系统载体构建 | 第53-55页 |
| 3.7.1 CmACO7、CmACO8基因第一轮PCR扩增 | 第53-54页 |
| 3.7.2 CmACO7、CmACO8基因第二轮PCR扩增 | 第54页 |
| 3.7.3 CmACO7、CmACO8基因CRISPR/Cas9表达载体重组质粒筛选 | 第54-55页 |
| 3.7.4 菌体PCR检测 | 第55页 |
| 3.8 T_1代植株检测 | 第55-58页 |
| 4 讨论和结论 | 第58-60页 |
| 4.1 讨论 | 第58-59页 |
| 4.1.1 关于甜瓜ACO基因家族 | 第58页 |
| 4.1.2 关于CmACO7, CmACO8基因 | 第58-59页 |
| 4.2 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68页 |
