| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第12-14页 |
| 第1章 综述 | 第14-28页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1.1 玫瑰孢链霉菌（Streptomyces roseosporus） | 第14-20页 |
| 1.1.1 概述 | 第14页 |
| 1.1.2 达托霉素 | 第14-16页 |
| 1.1.3 玫瑰孢链霉菌的次级代谢产物和隐性基因簇 | 第16-20页 |
| 1.2 链霉菌拟核结合蛋白 | 第20-25页 |
| 1.2.1 概述：拟合结合蛋白 | 第20页 |
| 1.2.2 DNA曲形蛋白：HupS、sIHF | 第20-22页 |
| 1.2.3 DNA桥连蛋白：H-NS、Lsr2 | 第22页 |
| 1.2.4 DNA保护蛋白：Dps | 第22-23页 |
| 1.2.5 配体结合蛋白：Crp | 第23-24页 |
| 1.2.6 转录调控蛋白：BldD | 第24页 |
| 1.2.7 特殊NAPs | 第24-25页 |
| 1.3 Lsr2研究进展 | 第25-26页 |
| 1.4 本实验的研究意义 | 第26-28页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第28-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-34页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.2 培养基 | 第29-31页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第31-32页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第32页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第32页 |
| 2.1.6 所用引物 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-50页 |
| 2.2.1 大肠杆菌的生长和保藏 | 第34页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的快速提取和重组菌株的筛选鉴定 | 第34页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第34-35页 |
| 2.2.4 DNA的酶切反应 | 第35页 |
| 2.2.5 质粒与DNA片段的连接反应 | 第35页 |
| 2.2.6 蛋白表达 | 第35页 |
| 2.2.7 蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE | 第36-38页 |
| 2.2.9 S. roseosporus基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 2.2.10 S. roseosporus Fosmid文库构建 | 第38-39页 |
| 2.2.11 PCR-targeting system | 第39-40页 |
| 2.2.12 接合转移 | 第40-41页 |
| 2.2.13 RNA提取 | 第41页 |
| 2.2.14 DNase I处理RNA样品 | 第41-42页 |
| 2.2.15 RNA浓度、纯度和完整性检测 | 第42页 |
| 2.2.16 PCR、RNA反转录、半定量PCR、实时荧光定量PCR | 第42-44页 |
| 2.2.17 抑菌实验 | 第44页 |
| 2.2.18 细胞膜脂肪酸组成鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.19 EMSA | 第45-46页 |
| 2.2.20 RNA-seq | 第46-48页 |
| 2.2.21 序列分析工具 | 第48-50页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第50-70页 |
| 3.1 S. roseosporus中lsr2的克隆和分析 | 第50-51页 |
| 3.1.1 lsr2的克隆与分析 | 第50-51页 |
| 3.1.2 不同时间点lsr2和lsr22的转录水平 | 第51页 |
| 3.2 敲除载体及敲除株的构建与筛选 | 第51-54页 |
| 3.2.1 S. roseosporus Fosmid文库构建和目的质粒筛选 | 第51-53页 |
| 3.2.2 lsr2敲除载体的构建和lsr2敲除株的筛选 | 第53-54页 |
| 3.2.3 lsr22敲除载体的构建和lsr22敲除株的筛选 | 第54页 |
| 3.3 lsr2和lsr22过表达载体的构建和突变株的筛选 | 第54-56页 |
| 3.3.1 lsr2和lsr22过表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.3.2 lsr2和lsr22过表达和互补菌株的筛选 | 第55-56页 |
| 3.4 Lsr2和Lsr22对S. roseosporus发育分化的影响 | 第56-59页 |
| 3.4.1 Δlsr2和 Δlsr22在不同培养基中的生长情况 | 第56-57页 |
| 3.4.2 Δlsr2和 Δlsr22在不同金属离子条件下的生长情况 | 第57页 |
| 3.4.3 lsr2和lsr22互补株和过表达株的生长形态 | 第57-58页 |
| 3.4.4 Lsr2对S. roseosporus孢子萌发的影响 | 第58-59页 |
| 3.5 Lsr2和Lsr22对S. roseosporus细胞膜脂肪酸组分的影响 | 第59页 |
| 3.6 Lsr2和Lsr22对S. roseosporus次级代谢产物生物合成的影响 | 第59-62页 |
| 3.6.1 lsr2和lsr22敲除对A21978C生物合成的影响 | 第59-60页 |
| 3.6.2 lsr2和lsr22敲除对其他次级代谢产物生物合成的影响 | 第60-61页 |
| 3.6.3 lsr2过表达对次级代谢产物生物合成的影响 | 第61-62页 |
| 3.7 Lsr2和Lsr22对S. roseosporus隐性基因簇转录的影响 | 第62-63页 |
| 3.8 转录组分析 | 第63-67页 |
| 3.8.1 差异基因GO分析 | 第63-65页 |
| 3.8.2 RNA-seq分析Lsr2对次级代谢基因簇的表达的影响 | 第65-66页 |
| 3.8.3 转录水平的qRT-PCR验证 | 第66-67页 |
| 3.9 Lsr2和Lsr22结合DNA的能力分析 | 第67-70页 |
| 3.9.1 Lsr2和Lsr22蛋白制备 | 第67-68页 |
| 3.9.2 探针的制备 | 第68页 |
| 3.9.3 EMSA反应 | 第68-70页 |
| 第4章 讨论 | 第70-74页 |
| 4.1 S. roseosporus中lsr2和lsr22的确定 | 第70页 |
| 4.2 S. roseosporus中Lsr2和Lsr22的功能 | 第70-74页 |
| 4.2.1 S. roseosporus中Lsr2和Lsr22对形态发育的影响 | 第70-71页 |
| 4.2.2 S. roseosporus中Lsr2和Lsr22对脂肪酸合成的影响 | 第71页 |
| 4.2.3 S. roseosporus中Lsr2和Lsr22对A21978C生物合成的影响 | 第71-72页 |
| 4.2.4 S. roseosporus中Lsr2和Lsr22对隐性基因簇转录的影响 | 第72-73页 |
| 4.2.5 Lsr2和Lsr22结合DNA的能力 | 第73-74页 |
| 第5章 总结与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 总结 | 第74页 |
| 5.2 展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 硕士期间发表论文与奖励情况 | 第86页 |
