摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第一章 文献综述 | 第10-18页 |
1.1 活性氧自由基的产生和氧化应激损伤 | 第10-11页 |
1.1.1 活性氧自由基的产生 | 第10页 |
1.1.2 氧化应激损伤 | 第10-11页 |
1.2 抗氧化损伤防线 | 第11-14页 |
1.2.1 Peroxiredoxin蛋白 | 第11-12页 |
1.2.2 硫氧还蛋白/硫氧还蛋白还原酶(Trx/TrxR)还原系统 | 第12页 |
1.2.3 小分子硫醇 | 第12-14页 |
1.3 甲硫氨酸亚砜还原酶(Msr)研究现状 | 第14-16页 |
1.3.1 MsrA | 第15页 |
1.3.2 MsrB | 第15-16页 |
1.4 谷氨酸棒杆菌综述 | 第16-17页 |
1.4.1 谷氨酸棒杆菌介绍 | 第16-17页 |
1.4.2 谷氨酸棒杆菌中Msr的研究现状 | 第17页 |
1.5 研究目的及意义 | 第17-18页 |
第二章 材料和方法 | 第18-24页 |
2.1 实验材料 | 第18-19页 |
2.1.1 菌株,质粒和引物 | 第18页 |
2.1.2 实验试剂,培养基和培养条件 | 第18-19页 |
2.2 试验方法 | 第19-24页 |
2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第19页 |
2.2.2 谷氨酸棒杆菌感受态细胞制备和转化 | 第19-20页 |
2.2.3 PCR反应体系 | 第20-21页 |
2.2.4 突变体的构建 | 第21页 |
2.2.5 互补菌株和原核表达菌株的构建 | 第21-22页 |
2.2.6 蛋白诱导表达与纯化 | 第22页 |
2.2.7 MetO还原能力实验 | 第22页 |
2.2.8 不同环境应激物胁迫下存活率分析 | 第22-23页 |
2.2.9 甲硫氨酸亚砜还原酶酶活测定 | 第23页 |
2.2.10 异源二聚体检测 | 第23页 |
2.2.11 β-gal酶活测定 | 第23-24页 |
第三章 实验结果 | 第24-33页 |
3.1 谷氨酸棒杆菌中MsrB序列分析 | 第24-25页 |
3.2 突变体的构建与筛选 | 第25-26页 |
3.2.1 单交换菌株的筛选 | 第25页 |
3.2.2 双交换菌株的筛选 | 第25-26页 |
3.3 MsrB还原MetO的能力检测及与MsrA的比较 | 第26-27页 |
3.4 MsrB在抗氧化胁迫中的作用及与MsrA的比较 | 第27-28页 |
3.4.1 MsrB对谷氨酸棒杆菌生长状态的影响 | 第27页 |
3.4.2 MsrB在氧化胁迫下的作用 | 第27-28页 |
3.5 MsrB进行MetO的还原机制探究 | 第28-31页 |
3.5.1.MsrB蛋白的表达纯化 | 第29页 |
3.5.2 MsrB和MsrA酶动力学比较 | 第29-30页 |
3.5.3 MsrB与Trx异源二聚体检测 | 第30-31页 |
3.6 SigH对msrB表达的影响 | 第31-33页 |
第四章 分析和讨论 | 第33-34页 |
第五章 结论 | 第34-35页 |
参考文献 | 第35-41页 |
附录 | 第41-43页 |
致谢 | 第43-44页 |
作者简介 | 第44页 |