| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-17页 |
| 1.1.1 髓过氧化物酶的生物学功能 | 第12-13页 |
| 1.1.2 髓过氧化物酶的基因结构 | 第13-14页 |
| 1.1.3 髓过氧化物酶的体内生物合成 | 第14-15页 |
| 1.1.4 髓过氧化物酶与疾病 | 第15-17页 |
| 1.2 重组MPO制备与表达的进展 | 第17-18页 |
| 1.2.1 国内研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2.2 国外研究现状 | 第18页 |
| 1.3 家蚕-杆状病毒表达系统 | 第18-22页 |
| 1.3.1 杆状病毒简介 | 第19-20页 |
| 1.3.2 杆状病毒表达系统研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 立题依据及研究内容 | 第22-24页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第22-23页 |
| 1.4.2 本论文的研究内容 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料和方法 | 第25-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第25页 |
| 2.1.2 工具酶及试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.3 其他试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 试剂的配制 | 第26-31页 |
| 2.2.1 分子克隆相关试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.2 细胞培养相关试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE相关试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.4 Western Blot相关试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.5 蛋白纯化相关试剂 | 第30-31页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2.4 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.4.1 感受态细胞制备 | 第32页 |
| 2.4.2 将MPO基因导入到感受态细胞 | 第32页 |
| 2.4.3 少量制备质粒DNA | 第32-33页 |
| 2.4.4 目的质粒浓度测定 | 第33页 |
| 2.4.5 大规模双酶切 | 第33-34页 |
| 2.4.6 胶回收 | 第34页 |
| 2.4.7 连接 | 第34页 |
| 2.4.8 转化涂板 | 第34-35页 |
| 2.4.9 少量制备质粒DNA | 第35页 |
| 2.4.10 双酶切验证 | 第35页 |
| 2.4.11 质粒测序 | 第35页 |
| 2.4.12 定点突变 | 第35页 |
| 2.4.13 转座 | 第35-36页 |
| 2.4.14 菌液PCR验证 | 第36-37页 |
| 2.4.15 Bacmid DNA提取 | 第37-38页 |
| 2.4.16 BmN细胞的培养 | 第38页 |
| 2.4.17 转染（病毒制备及扩增） | 第38-39页 |
| 2.4.18 含人MPO重组病毒在五龄家蚕中的表达时相 | 第39页 |
| 2.4.19 在五龄家蚕中大量表达的人重组MPO的分离纯化 | 第39-40页 |
| 2.4.20 SDS-PAGE | 第40页 |
| 2.4.21 蛋白浓度的测定 | 第40-41页 |
| 2.4.22 经分离纯化后目的蛋白的蛋白质印迹杂交（Western Blot）鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4.23 经分离纯化后目的蛋白的质谱鉴定 | 第42页 |
| 2.4.24 分离纯化后的人MPO酶活性分析 | 第42页 |
| 2.4.25 分离纯化后的人MPO的糖基化验证 | 第42-43页 |
| 2.4.26 分离纯化后的人MPO与病人阳性血清的抗原性分析 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第44-60页 |
| 3.1 人MPO的N-端带His标签蛋白的制备 | 第44-48页 |
| 3.1.1 重组供体质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.1.2 重组家蚕杆状病毒的制备 | 第45-46页 |
| 3.1.3 在五龄家蚕中大量表达的人重组MPO经镍-柱的分离纯化 | 第46-48页 |
| 3.2 MPO的C-端带His标签蛋白的制备 | 第48-52页 |
| 3.2.1 含人MPO重组病毒在五龄家蚕中的表达时相 | 第48-49页 |
| 3.2.2 在五龄家蚕中大量表达的人重组MPO经镍-柱的分离纯化 | 第49-50页 |
| 3.2.3 经镍-柱分离纯化后的MPO蛋白再经离子交换层析柱Mono S的分离纯化 | 第50-52页 |
| 3.3 MPO生化特性分析 | 第52-56页 |
| 3.3.1 经分离纯化后的目的蛋白的蛋白质印迹杂交 (Western Blot) 鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.2 经分离纯化后的目的蛋白的质谱鉴定 | 第53页 |
| 3.3.3 分离纯化后的人MPO酶活性分析 | 第53-54页 |
| 3.3.4 分离纯化后的人MPO的糖基化分析 | 第54-56页 |
| 3.4 分离纯化后的人MPO与病人阳性血清的抗原性分析 | 第56-57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-60页 |
| 第四章 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 硕士期间学术研究成果 | 第67页 |
