| 致谢 | 第4-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-17页 |
| 第1章 引言 | 第17-29页 |
| 1.1 选题背景 | 第17-19页 |
| 1.2 科学问题及研究意义 | 第19-20页 |
| 1.3 Aβ 蛋白简介 | 第20页 |
| 1.4 Aβ 蛋白的产生 | 第20-23页 |
| 1.5 Aβ 蛋白的结构特点 | 第23-25页 |
| 1.6 Aβ 蛋白可能的功能 | 第25-26页 |
| 1.7 研究进展 | 第26-29页 |
| 第2章 实验材料 | 第29-39页 |
| 2.1 菌种和细胞系、质粒、培养基 | 第29-32页 |
| 2.1.1 菌种和细胞系 | 第29-30页 |
| 2.1.2 质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.3 培养基 | 第31-32页 |
| 2.2 药品与试剂 | 第32-35页 |
| 2.2.1 主要试剂耗材 | 第32-34页 |
| 2.2.2 主要试剂盒 | 第34-35页 |
| 2.3 仪器与设备 | 第35-36页 |
| 2.4 溶液与缓冲液 | 第36-39页 |
| 第3章 实验方法 | 第39-65页 |
| 3.1 部分实验原理 | 第39-49页 |
| 3.1.1 Tango~(TM)蛋白质相互作用实验原理 | 第39页 |
| 3.1.2 AlphaScreen实验原理 | 第39-40页 |
| 3.1.3 AlphaLISA实验原理 | 第40-41页 |
| 3.1.4 生物发光共振能量转移实验 | 第41-42页 |
| 3.1.5 PCR原理 | 第42-46页 |
| 3.1.6 结晶原理 | 第46-49页 |
| 3.2 物种基因的获得 | 第49-50页 |
| 3.3 细胞转化和转染 | 第50-53页 |
| 3.3.1 大肠杆菌感受态的制备及细胞转化 | 第50-51页 |
| 3.3.2 哺乳动物细胞（FTP7细胞、HTL细胞）转染 | 第51页 |
| 3.3.3 Bacmid质粒的制备 | 第51-52页 |
| 3.3.4 Sf9细胞转染 | 第52-53页 |
| 3.4 细胞培养 | 第53-54页 |
| 3.4.1 大肠杆菌培养 | 第53页 |
| 3.4.2 哺乳动物细胞培养 | 第53页 |
| 3.4.3 Sf9细胞培养 | 第53-54页 |
| 3.5 PS1/PS2基因缺失HTL细胞系建立 | 第54-56页 |
| 3.6 蛋白表达纯化 | 第56-59页 |
| 3.6.1 大肠杆菌表达蛋白纯化 | 第56-58页 |
| 3.6.2 FTP7细胞表达蛋白纯化 | 第58页 |
| 3.6.3 Sf9细胞表达蛋白纯化 | 第58-59页 |
| 3.7 γ-分泌酶Epsilon-酶切实验 | 第59-60页 |
| 3.8 基于细胞的相互作用实验 | 第60页 |
| 3.9 脂质体制备和AlphaScreen实验 | 第60页 |
| 3.10 AlphaLISA实验 | 第60-61页 |
| 3.11 生物发光共振能量转移实验（BRET） | 第61页 |
| 3.12 RNA分离和定量实时荧光PCR | 第61-63页 |
| 3.13 PIP2调节及Aβ 分析 | 第63页 |
| 3.14 全细胞蛋白提取及蛋白免疫印迹分析 | 第63-64页 |
| 3.15 定点突变 | 第64页 |
| 3.16 结晶尝试 | 第64-65页 |
| 第4章 实验结果及分析 | 第65-111页 |
| 4.1 阿尔兹海默病相关的C99突变与 γ-分泌酶的关系 | 第65-78页 |
| 4.1.1 Epsilon-酶切实验分析方法的建立 | 第65-68页 |
| 4.1.2 阿尔兹海默病突变体对 γ-分泌酶的影响 | 第68-70页 |
| 4.1.3 Epsilon-酶切实验Aβ 多肽产生研究 | 第70-72页 |
| 4.1.4 γ-分泌酶C99底物识别机制和酶切位点选择性模型 | 第72-75页 |
| 4.1.5 γ-分泌酶对底物识别模型的普适性 | 第75-78页 |
| 4.2 γ-分泌酶最短底物研究及底物识别模型的深入研究 | 第78-89页 |
| 4.2.1 C99底物最短序列研究 | 第78-81页 |
| 4.2.2 N端胞外区负电荷的必要性 | 第81-85页 |
| 4.2.3 C端胞内区脂膜结合 | 第85-89页 |
| 4.3 C99以及Aβ 二聚体研究 | 第89-100页 |
| 4.3.1 C99片段在细胞内的二聚化的测定 | 第89-92页 |
| 4.3.2 部分细胞外和部分细胞内区域不是C99二聚化所必需的 | 第92-93页 |
| 4.3.3 脯氨酸突变鉴定C99同源二聚化的关键氨基酸 | 第93-97页 |
| 4.3.4 C99同源二聚化模型 | 第97-100页 |
| 4.4 C99/Aβ 结构生物学研究 | 第100-111页 |
| 4.4.1 C99及其C端截短蛋白表达纯化 | 第100-101页 |
| 4.4.2 ZAβ3 抗体稳定Aβ 多肽 | 第101-106页 |
| 4.4.3 合成多肽晶体学研究 | 第106-109页 |
| 4.4.4 γ-分泌酶复合物表达尝试 | 第109-111页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第111-116页 |
| 5.1 FAD突变对C99酶切的影响 | 第111-112页 |
| 5.2 最短底物研究及底物识别模型的深入研究 | 第112-113页 |
| 5.3 C99以及Aβ 二聚化模型 | 第113-114页 |
| 5.4 C99/Aβ 结构生物学研究 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-126页 |
| 附录 | 第126-137页 |
| 1. Calibration of Aβ peptide levels | 第126页 |
| 2. Protein purification Buffers | 第126-127页 |
| 3. Primers | 第127-128页 |
| 4. Websites | 第128-129页 |
| 6. Gene Sequences | 第129-137页 |
| 作者简历 | 第137页 |
