| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 疫苗概述 | 第10-12页 |
| 1.2 猪细小病毒 | 第12-14页 |
| 1.2.1 预防与疫苗 | 第12-13页 |
| 1.2.2 形态和理化特性 | 第13页 |
| 1.2.3 细胞培养特性 | 第13页 |
| 1.2.4 PPV的致病性和致病机理 | 第13-14页 |
| 1.2.5 基因组结构和复制型DNA的特点 | 第14页 |
| 1.3 动物细胞大规模培养技术 | 第14-17页 |
| 1.3.1 悬浮细胞大规模培养 | 第15页 |
| 1.3.2 贴壁依赖性细胞大规模培养 | 第15-16页 |
| 1.3.3 动物细胞大规模培养技术在动物疫苗生产中的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 动物细胞代谢流研究 | 第17-20页 |
| 1.4.1 葡萄糖代谢 | 第18-19页 |
| 1.4.2 氨基酸代谢 | 第19页 |
| 1.4.3 细胞感染病毒后的代谢迁移 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题研究目的、意义及内容 | 第20-22页 |
| 第2章 PK-15细胞低血清培养基开发 | 第22-28页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料和实验方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.2.2 PK-15细胞的复苏和传代培养 | 第22-23页 |
| 2.2.3 PK-15细胞在低血清培养基中的适应和传代 | 第23页 |
| 2.2.4 PK-15细胞的冻存 | 第23页 |
| 2.2.5 PK-15细胞生长曲线的测定 | 第23页 |
| 2.2.6 细胞密度、存活率及比生长速率的测定和计算 | 第23页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第23-27页 |
| 2.3.1 PK-15细胞在高血清和低血清培养基中的生长情况 | 第23-26页 |
| 2.3.2 PK-15细胞在低血清培养基中的连续传代 | 第26-27页 |
| 2.4 小结 | 第27-28页 |
| 第3章 PK-15细胞低血清微载体悬浮培养生产猪细小病毒工艺优化 | 第28-46页 |
| 3.1 前言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第28-32页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.2.2 PPV在PK-15细胞上扩毒及收毒 | 第28-29页 |
| 3.2.3 PPV在PK-15细胞上接毒时间优化 | 第29页 |
| 3.2.4 PPV在PK-15细胞上接毒MOI优化 | 第29页 |
| 3.2.5 血清对PPV感染的的影响 | 第29页 |
| 3.2.6 考察接毒后胞内ATP水平 | 第29页 |
| 3.2.7 Cytodex 1微载体处理 | 第29页 |
| 3.2.8 结晶紫染色计数法 | 第29页 |
| 3.2.9 1.5L反应器微载体悬浮培养PK-15细胞优化 | 第29-30页 |
| 3.2.10 转瓶上接毒时间优化 | 第30页 |
| 3.2.11 1.5L和5L反应器上优化结果验证 | 第30页 |
| 3.2.12 免疫荧光法检测PPV病毒滴度 | 第30-31页 |
| 3.2.13 胞外代谢物分析 | 第31页 |
| 3.2.14 分析和计算方法 | 第31-32页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第32-45页 |
| 3.3.1 PPV病毒静置培养工艺优化 | 第32-39页 |
| 3.3.1.1 高血清和低血清培养基产毒情况比较 | 第32页 |
| 3.3.1.2 PPV接毒时间优化 | 第32-36页 |
| 3.3.1.3 PPV接毒时MOI优化 | 第36-37页 |
| 3.3.1.4 血清对病毒感染的影响 | 第37页 |
| 3.3.1.5 PPV最佳产毒工艺下的代谢特性 | 第37-39页 |
| 3.3.1.6 病毒增殖与乳酸对葡萄糖得率的关系 | 第39页 |
| 3.3.2 PPV病毒反应器微载体悬浮培养工艺优化 | 第39-45页 |
| 3.3.2.1 1.5L反应器上微载体悬浮培养PK-15细胞微载体浓度优化 | 第40-41页 |
| 3.3.2.2 1.5L反应器上微载体悬浮培养PK-15细胞接种密度优化 | 第41-42页 |
| 3.3.2.3 PK-15细胞微载体悬浮培养接毒时间优化 | 第42-43页 |
| 3.3.2.4 1.5L反应器微载体悬浮培养PK-15细胞生产PPV | 第43-44页 |
| 3.3.2.5 5L反应器微载体悬浮培养PK-15细胞生产PPV | 第44-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第4章 PK-15细胞代谢流研究及接种PPV后的代谢变化 | 第46-66页 |
| 4.1 前言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第46-52页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.2.2 PK-15细胞葡萄糖和谷氨酰胺同位素标记实验 | 第46页 |
| 4.2.3 PK-15细胞接种PPV葡萄糖和谷氨酰胺同位素标记实验 | 第46页 |
| 4.2.4 GC-MS样品处理 | 第46-47页 |
| 4.2.5 GC-MS参数设置 | 第47-48页 |
| 4.2.6 氨基酸衍生物及其特征离子碎片 | 第48-51页 |
| 4.2.7 ~(13)C标记丰度信息校正 | 第51-52页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第52-64页 |
| 4.3.1 PK-15细胞在MEM培养基中的生长代谢 | 第52-53页 |
| 4.3.2 100%~(13)C全标记葡萄糖 | 第53-59页 |
| 4.3.2.1 PK-15细胞在MEM(缺Ser、Gly和Ala)培养基中的代谢 | 第57-58页 |
| 4.3.2.2 PK-15细胞在MEM(缺Ser、Gly和Ala)培养基中连续传代 | 第58-59页 |
| 4.3.3 100%~(13)全标记谷氨酰胺实验 | 第59-62页 |
| 4.3.4 PK-15细胞接种PPV病毒后的代谢变化 | 第62-64页 |
| 4.3.4.1 100%[1,2-~(13)C]葡萄糖标记实验 | 第62-64页 |
| 4.3.4.2 100%~(13)C全标记谷氨酰胺实验 | 第64页 |
| 4.4 小结 | 第64-66页 |
| 第5章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66页 |
| 5.2 主要创新点 | 第66页 |
| 5.3 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
