| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 中英文对照和缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-48页 |
| 1.1 引言 | 第17-18页 |
| 1.2 种子细胞 | 第18-26页 |
| 1.2.1 种子细胞的来源 | 第18-21页 |
| 1.2.1.1 骨 | 第18-19页 |
| 1.2.1.2 骨膜 | 第19页 |
| 1.2.1.3 骨髓 | 第19-20页 |
| 1.2.1.4 骨外组织 | 第20-21页 |
| 1.2.2 种子细胞的种类 | 第21-26页 |
| 1.2.2.1 成骨细胞 | 第21页 |
| 1.2.2.2 间充质干细胞 | 第21-24页 |
| 1.2.2.3 胚胎干细胞 | 第24-25页 |
| 1.2.2.4 基因修饰种子细胞 | 第25-26页 |
| 1.3 生物支架材料 | 第26-39页 |
| 1.3.1 天然生物材料 | 第26-31页 |
| 1.3.1.1 甲壳素和壳聚糖 | 第27-28页 |
| 1.3.1.2 胶原和明胶 | 第28-29页 |
| 1.3.1.3 透明质酸 | 第29页 |
| 1.3.1.4 纤维蛋白 | 第29-30页 |
| 1.3.1.5 海藻酸盐 | 第30页 |
| 1.3.1.6 淀粉 | 第30-31页 |
| 1.3.1.7 珊瑚 | 第31页 |
| 1.3.2 人工合成生物材料 | 第31-37页 |
| 1.3.2.1 羟基磷灰石 | 第32页 |
| 1.3.2.2 磷酸钙水泥 | 第32-33页 |
| 1.3.2.3 磷酸三钙 | 第33页 |
| 1.3.2.4 生物活性玻璃 | 第33-34页 |
| 1.3.2.5 脂肪族聚酯 | 第34-35页 |
| 1.3.2.6 聚氨酯 | 第35页 |
| 1.3.2.7 聚酸酐 | 第35-36页 |
| 1.3.2.8 氨基酸聚合物 | 第36-37页 |
| 1.3.2.9 氧化乙烯类 | 第37页 |
| 1.3.3 纳米材料 | 第37-38页 |
| 1.3.4 复合材料 | 第38-39页 |
| 1.4 工程化骨组织的构建 | 第39-44页 |
| 1.4.1 生物反应器 | 第40-43页 |
| 1.4.1.1 机械搅拌式生物反应器 | 第40页 |
| 1.4.1.2 灌注式生物反应器 | 第40-41页 |
| 1.4.1.3 气升式生物反应器 | 第41页 |
| 1.4.1.4 膜式生物反应器 | 第41-42页 |
| 1.4.1.5 旋转壁式生物反应器 | 第42页 |
| 1.4.1.6 微载体型生物反应器 | 第42-43页 |
| 1.4.1.7 体内生物反应器 | 第43页 |
| 1.4.2 种子细胞-材料复合物的三维动态构建 | 第43-44页 |
| 1.5 骨组织工程的临床应用 | 第44-46页 |
| 1.6 本论文的研究内容及研究意义 | 第46-48页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第46-47页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第47-48页 |
| 第二章 人骨髓间充质干细胞的增殖和分化能力验证 | 第48-62页 |
| 2.1 引言 | 第48页 |
| 2.2 实验材料 | 第48-51页 |
| 2.2.1 种子细胞 | 第48页 |
| 2.2.2 hBMSCs成骨分化和成软骨分化培养基 | 第48-50页 |
| 2.2.3 其他试剂，耗材和仪器 | 第50-51页 |
| 2.3 溶液配制 | 第51页 |
| 2.4 细胞的基本操作 | 第51-52页 |
| 2.4.1 细胞复苏 | 第51-52页 |
| 2.4.2 细胞传代 | 第52页 |
| 2.4.3 细胞冻存 | 第52页 |
| 2.5 实验方法 | 第52-55页 |
| 2.5.1 hBMSCs生长的形态观察 | 第52页 |
| 2.5.2 hBMSCs增殖的计数方法 | 第52-53页 |
| 2.5.3 hBMSCs在孔板平面上的成骨和成软骨分化 | 第53页 |
| 2.5.4 VON KASSA染色 | 第53页 |
| 2.5.5 Alcain blue染色 | 第53页 |
| 2.5.6 hBMSCs碱性磷酸酶（ALP）活性测定 | 第53-54页 |
| 2.5.7 hBMSCs糖胺多糖（GAG）总含量测定 | 第54页 |
| 2.5.8 Western blotting方法检测成骨分化和成软骨分化标记蛋白 | 第54-55页 |
| 2.5.9 统计分析方法 | 第55页 |
| 2.6 结果与讨论 | 第55-61页 |
| 2.6.1 hBMSCs增殖时的形态变化 | 第55页 |
| 2.6.2 hBMSCs增殖的数量规律 | 第55-56页 |
| 2.6.3 hBMSCs分化期间的形态变化 | 第56-57页 |
| 2.6.4 hBMSCs分化期间染色检测结果与分析 | 第57-58页 |
| 2.6.5 hBMSCs分化期间相关生化指标检测结果与分析 | 第58-60页 |
| 2.6.6 hBMSCs分化期间相关标志基因蛋白表达检测结果 | 第60-61页 |
| 2.7 本章小结 | 第61-62页 |
| 第三章 细胞因子对HBMSCS分化的影响 | 第62-78页 |
| 3.1 引言 | 第62页 |
| 3.2 实验材料 | 第62-64页 |
| 3.2.1 种子细胞 | 第62页 |
| 3.2.2 细胞成软骨分化培养基 | 第62-63页 |
| 3.2.3 细胞因子 | 第63页 |
| 3.2.4 试剂，耗材和仪器 | 第63-64页 |
| 3.3 实验方法 | 第64-68页 |
| 3.3.1 单独使用四种细胞因子 | 第64页 |
| 3.3.2 使用IFN-β 和TGF-β3 的不同组合 | 第64-65页 |
| 3.3.3 使用TGF-β3 和不同浓度IFN-β 的组合 | 第65页 |
| 3.3.4 Alcain blue染色 | 第65页 |
| 3.3.5 hBMSCs糖胺聚糖（GAG）总含量的测定 | 第65页 |
| 3.3.6 成软骨分化标志基因的荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测 | 第65-68页 |
| 3.3.6.1 总RNA抽提 | 第65-66页 |
| 3.3.6.2 去基因组 | 第66页 |
| 3.3.6.3 总RNA纯度和完整性检测 | 第66页 |
| 3.3.6.4 逆转录 | 第66-67页 |
| 3.3.6.5 定量PCR | 第67-68页 |
| 3.3.7 Western blotting方法检测成软骨分化标志蛋白 | 第68页 |
| 3.3.8 统计分析方法 | 第68页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第68-76页 |
| 3.4.1 单独使用四种细胞因子时对hBMSCs成软骨分化的影响 | 第68-70页 |
| 3.4.2 IFN-β 和TGF-β3 的不同组合对hBMSCs成软骨分化的影响 | 第70-75页 |
| 3.4.3 TGF-β3 和不同浓度IFN-β 的组合对h BMSCs成软骨分化的影响 | 第75-76页 |
| 3.5 本章小结 | 第76-78页 |
| 第四章 PLGA/TCP材料的体外生物相容性和体内生物安全性研究 | 第78-94页 |
| 4.1 引言 | 第78页 |
| 4.2 实验材料 | 第78-80页 |
| 4.2.1 种子细胞 | 第78页 |
| 4.2.2 细胞成骨分化培养基 | 第78页 |
| 4.2.3 PLGA/TCP材料 | 第78-79页 |
| 4.2.3.1 PLGA/TCP材料生理盐水浸提液 | 第79页 |
| 4.2.3.2 PLGA/TCP材料棉籽油浸提液 | 第79页 |
| 4.2.4 实验动物 | 第79页 |
| 4.2.5 试剂，耗材和仪器 | 第79-80页 |
| 4.3 实验方法 | 第80-84页 |
| 4.3.1 hBMSCs和PLGA/TCP材料在体外的生物相容性检验 | 第80-81页 |
| 4.3.1.1 hBMSCs在PLGA/TCP材料上的接种和换液 | 第80-81页 |
| 4.3.1.2 hBMSCs在PLGA/TCP材料上增殖和成骨分化的扫描电镜检测 | 第81页 |
| 4.3.1.3 MTT检测hBMSCs在PLGA/TCP材料上的增殖 | 第81页 |
| 4.3.1.4 hBMSCs在PLGA/TCP材料上成骨分化的ALP酶活性检测 | 第81页 |
| 4.3.2 PLGA/TCP材料在动物体内的生物安全性检验 | 第81-84页 |
| 4.3.2.1 热原实验 | 第81-82页 |
| 4.3.2.2 溶血实验 | 第82页 |
| 4.3.2.3 急性全身毒性实验 | 第82-83页 |
| 4.3.2.4 皮内刺激反应实验 | 第83页 |
| 4.3.2.5 皮下植入实验 | 第83-84页 |
| 4.3.3 统计分析方法 | 第84页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第84-93页 |
| 4.4.1 hBMSCs和PLGA/TCP材料的生物相容性实验结果 | 第84-88页 |
| 4.4.1.1 hBMSCs在PLGA/TCP材料上增殖的检测结果 | 第84-86页 |
| 4.4.1.2 hBMSCs在PLGA/TCP材料上的成骨分化效果 | 第86-88页 |
| 4.4.2 PLGA/TCP材料在动物体内的生物安全性实验结果 | 第88-93页 |
| 4.4.2.1 PLGA/TCP材料的热原测试结果 | 第88-89页 |
| 4.4.2.2 PLGA/TCP材料的溶血实验结果 | 第89-90页 |
| 4.4.2.3 PLGA/TCP材料的急性全身毒性实验结果 | 第90页 |
| 4.4.2.4 皮内刺激反应实验结果 | 第90-91页 |
| 4.4.2.5 皮下植入实验结果 | 第91-93页 |
| 4.5 本章小结 | 第93-94页 |
| 第五章 饲喂-培养灌流细胞罐体外制备成骨和成软骨复合物 | 第94-109页 |
| 5.1 引言 | 第94页 |
| 5.2 实验材料 | 第94-97页 |
| 5.2.1 种子细胞 | 第94页 |
| 5.2.2 hBMSCs成骨分化和成软骨分化培养基 | 第94页 |
| 5.2.3 细胞因子 | 第94-95页 |
| 5.2.4 PLGA/TCP支架 | 第95页 |
| 5.2.5 饲喂-培养灌流细胞罐系统 | 第95页 |
| 5.2.6 试剂，耗材和仪器 | 第95-97页 |
| 5.3 实验方法 | 第97-99页 |
| 5.3.1 细胞罐的安装和无菌测试 | 第97页 |
| 5.3.2 hBMSCs在孔板中的静态培养 | 第97页 |
| 5.3.3 hBMSCs和PLGA/TCP支架复合物在细胞罐中的动态培养分化 | 第97-98页 |
| 5.3.4 扫描电镜检测hBMSCs的成骨分化和成软骨分化状态 | 第98页 |
| 5.3.5 ALP酶活性检测hBMSCs的成骨分化水平 | 第98-99页 |
| 5.3.6 GAG总含量检测hBMSCs的成软骨分化水平 | 第99页 |
| 5.3.7 qRT-PCR方法检测hBMSCs成骨和成软骨分化标志基因的表达量 | 第99页 |
| 5.3.8 Western blotting方法检测hBMSCs成骨和成软骨分化标志蛋白的表达量 | 第99页 |
| 5.3.9 统计分析方法 | 第99页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第99-108页 |
| 5.4.1 细胞罐各参数的实时控制 | 第99-102页 |
| 5.4.2 细胞罐中hBMSCs和PLGA/TCP支架复合物的成骨分化和成软骨分化效果 | 第102-108页 |
| 5.5 本章小结 | 第108-109页 |
| 结论与展望 | 第109-113页 |
| 参考文献 | 第113-128页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 附件 | 第130页 |
