| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩写对照表 | 第13-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-41页 |
| 1.1 糖基化修饰概述 | 第15-25页 |
| 1.1.1 蛋白翻译后修饰 | 第15-17页 |
| 1.1.2 糖基化修饰与功能 | 第17-21页 |
| 1.1.3 肿瘤细胞表面特异性糖基化修饰与功能 | 第21-25页 |
| 1.2 高效标记细胞表面特异性糖链 | 第25-32页 |
| 1.2.1 特异性标记细胞表面糖链方法概述 | 第25-29页 |
| 1.2.2 代谢标记和邻位连接技术原理及联合应用 | 第29-32页 |
| 1.3 建立在鼠李糖基础上的免疫疗法 | 第32-39页 |
| 1.3.1 肿瘤免疫疗法概述 | 第32-34页 |
| 1.3.2 以糖链为靶点的肿瘤免疫疗法 | 第34-39页 |
| 立题依据和意义 | 第39-41页 |
| 第二章 应用代谢标记和邻位连接联合技术(METPLA)标记细胞表面特异性糖链 | 第41-83页 |
| 2.1 材料与方法 | 第41-62页 |
| 2.1.1 核酸序列 | 第41-43页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第43-46页 |
| 2.1.3 主要缓冲液配方 | 第46-47页 |
| 2.1.4 细胞培养 | 第47页 |
| 2.1.5 EGFR、GLUT4基因质粒的构建 | 第47-50页 |
| 2.1.6 EGFR、GLUT4基因突变体的构建 | 第50页 |
| 2.1.7 shRNA载体的构建 | 第50-51页 |
| 2.1.8 无内毒素质粒的提取 | 第51-52页 |
| 2.1.9 转染无内毒素质粒到细胞 | 第52页 |
| 2.1.10 shRNA慢病毒制备及感染细胞 | 第52-54页 |
| 2.1.11 细胞中总RNA的提取及反转录 | 第54-56页 |
| 2.1.12 荧光定量PCR | 第56页 |
| 2.1.13 细胞代谢标记的药物处理 | 第56-57页 |
| 2.1.14 TCEP介导的细胞表面的Click反应 | 第57页 |
| 2.1.15 EGFR蛋白水平的唾液酸及果糖糖基化检测 | 第57-59页 |
| 2.1.16 总蛋白水平的唾液酸糖基化和果糖糖基化检测 | 第59-60页 |
| 2.1.17 邻位连接探针的制备 | 第60页 |
| 2.1.18 PLA反应 | 第60-61页 |
| 2.1.19 EGF和AG1478对细胞的处理 | 第61页 |
| 2.1.20 EGFR二聚体的检测 | 第61-62页 |
| 2.2 结果与分析 | 第62-81页 |
| 2.2.1 METPLA反应特异性的鉴定 | 第62-65页 |
| 2.2.2 METPLA能特异性的检测EGFR的唾液酸化修饰 | 第65-68页 |
| 2.2.3 唾液酸化修饰的EGFR蛋白在细胞中的定位 | 第68-69页 |
| 2.2.4 METPLA能够检测其他类型的糖基化修饰 | 第69-70页 |
| 2.2.5 EGFR shRNA、ST6GalI shRNA的干扰效率鉴定 | 第70-71页 |
| 2.2.6 N-terminal EGFR antibody能特异性检测二聚体EGFR的唾液酸化修饰 | 第71-73页 |
| 2.2.7 利用METPLA原位标记细胞中EGFR二聚体的动态变化 | 第73-77页 |
| 2.2.8 降低唾液酸转移酶ST6GalI的表达增强EGFR岩藻糖修饰的荧光信号 | 第77-79页 |
| 2.2.9 METPLA亦能标记影像外源EGFR的二聚体动态变化 | 第79-81页 |
| 2.3 讨论 | 第81-83页 |
| 第三章 通过重组细胞表面的糖链为肿瘤细胞提供免疫治疗 | 第83-104页 |
| 3.1 材料与方法 | 第83-92页 |
| 3.1.1 主要试剂和仪器 | 第83-85页 |
| 3.1.2 细胞培养 | 第85页 |
| 3.1.3 DSPE-PEG2k-FA的制备 | 第85-86页 |
| 3.1.4 复合物6的合成 | 第86-89页 |
| 3.1.5 脂质体的制备 | 第89页 |
| 3.1.6 脂质体处理细胞 | 第89-90页 |
| 3.1.7 荧光标记细胞表面的GalNAz | 第90页 |
| 3.1.8 免疫荧光标记细胞表面的鼠李糖 | 第90页 |
| 3.1.9 在细胞表面标记鼠李糖(Rha)和叶酸受体(FR)的共定位 | 第90-91页 |
| 3.1.10 流式分析细胞表面Rha表位的数量 | 第91页 |
| 3.1.11 细胞毒性检测 | 第91-92页 |
| 3.2 结果与分析 | 第92-102页 |
| 3.2.1 脂质体的粒径鉴定 | 第92-93页 |
| 3.2.2 利用f-LP-GalNAz脂质体通过FR-FA受体配体结合的方式,高效地将GalNAz传递到肿瘤细胞内 | 第93-96页 |
| 3.2.3 肿瘤细胞表面的叠氮数量随着GalNAz浓度的增加而增加 | 第96页 |
| 3.2.4 Rha能有效地靶向到肿瘤细胞表面 | 第96-98页 |
| 3.2.5 肿瘤细胞表面Rha表位随着GalNAz浓度的增加而增加 | 第98-99页 |
| 3.2.6 Rha表位引起补体依赖的细胞毒性 | 第99-102页 |
| 3.3 讨论 | 第102-104页 |
| 主要成果与创新点 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 个人简历 | 第115页 |
