| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 肌肉生长抑制素基因的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 MSTN的发现 | 第10页 |
| 1.1.2 MSTN的结构 | 第10页 |
| 1.1.3 MSTN的特异性 | 第10-11页 |
| 1.1.4 MSTN的生物学功能 | 第11页 |
| 1.1.5 MSTN的应用与前景 | 第11-12页 |
| 1.2 人工核酸酶基因靶向编辑技术的发展 | 第12-18页 |
| 1.2.1 锌指核酸酶技术 | 第12-13页 |
| 1.2.2 类转录激活因子样效应物核酸酶技术 | 第13-14页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9技术 | 第14-17页 |
| 1.2.4 NgAgo-gDNA技术 | 第17-18页 |
| 1.3 转基因生物安全性 | 第18页 |
| 1.4 本文研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 编辑蒙古牛MSTN基因CRISPR/Cas9载体的构建 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第20页 |
| 2.1.3 实验主要试剂配制方法 | 第20-21页 |
| 2.2 实验内容与方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 编辑蒙古牛MSTN基因CRISPR/Cas9载体的构建 | 第21-23页 |
| 2.2.2 载体的活性检测 | 第23-25页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第25-26页 |
| 2.3.1 CRISPR/Cas9质粒图谱 | 第25-26页 |
| 2.3.2 细胞基因组PCR结果 | 第26页 |
| 2.3.3 载体活性检测结果 | 第26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 2.5 小结 | 第27-28页 |
| 3 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞系的建立 | 第28-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第28页 |
| 3.1.2 实验试剂及耗材 | 第28页 |
| 3.1.3 实验主要试剂配制方法 | 第28-29页 |
| 3.2 实验内容与方法 | 第29-32页 |
| 3.2.1 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞原代培养 | 第29页 |
| 3.2.2 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞传代培养 | 第29-30页 |
| 3.2.3 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞冻存和复苏 | 第30页 |
| 3.2.4 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞生长曲线的测定 | 第30-31页 |
| 3.2.5 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞的染色体数目分析 | 第31页 |
| 3.2.6 蒙古牛胎儿的性别鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞原代培养 | 第32-33页 |
| 3.3.2 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞传代培养 | 第33页 |
| 3.3.3 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| 3.3.4 蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞的染色体数目分析 | 第34页 |
| 3.3.5 蒙古牛胎儿的性别鉴定 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35页 |
| 3.5 小结 | 第35-36页 |
| 4 无标记编辑蒙古牛MSTN基因成纤维细胞株的建立 | 第36-44页 |
| 4.1 实验材料 | 第36页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第36页 |
| 4.1.2 实验试剂及耗材 | 第36页 |
| 4.1.3 实验主要试剂配制方法 | 第36页 |
| 4.2 实验内容与方法 | 第36-39页 |
| 4.2.1 细胞转染条件摸索 | 第36-37页 |
| 4.2.2 无标记编辑蒙古牛MSTN基因成纤维细胞株的建立 | 第37-39页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第39-42页 |
| 4.3.1 细胞转染条件摸索 | 第39-40页 |
| 4.3.2 CRISPR/Cas9载体与成纤维细胞共转染结果 | 第40页 |
| 4.3.3 单细胞培养结果 | 第40-41页 |
| 4.3.4 单细胞株鉴定结果 | 第41-42页 |
| 4.4 讨论 | 第42-43页 |
| 4.5 小结 | 第43-44页 |
| 5 总体结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录 | 第51-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
