| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 鸭疫里默氏杆菌研究进展 | 第14-20页 |
| 1.1.1 鸭疫里默氏杆菌病概述 | 第14页 |
| 1.1.2 鸭疫里默氏杆菌病原学 | 第14-15页 |
| 1.1.3 鸭疫里默氏杆菌的血清型 | 第15-16页 |
| 1.1.4 鸭疫里默氏杆菌毒力因子 | 第16-19页 |
| 1.1.5 鸭疫里默氏杆菌疫苗的研发 | 第19-20页 |
| 1.2 鸭疫里默氏杆菌耐药现状 | 第20-26页 |
| 1.2.1 产钝化酶或水解酶介导的鸭疫里默氏杆菌耐药 | 第21-24页 |
| 1.2.2 药物作用靶位点与鸭疫里默氏杆菌耐药性关系 | 第24-25页 |
| 1.2.3 外排泵介导的鸭疫里默氏杆菌耐药 | 第25页 |
| 1.2.4 整合子(基因盒)介导的鸭疫里默氏杆菌耐药 | 第25页 |
| 1.2.5 细菌细胞膜通透性与耐药性的关系 | 第25-26页 |
| 第二章 鸭疫里默氏杆菌M949_0011基因的克隆表达 | 第26-42页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验菌株及质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 菌株的培养 | 第29页 |
| 2.2.2 基因组的提取 | 第29页 |
| 2.2.3 设计引物和PCR扩增目的片断 | 第29-30页 |
| 2.2.4 M949_0011基因的生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.2.5 胶回收PCR产物 | 第30-31页 |
| 2.2.6 双酶切目的基因和pET-28a载体 | 第31页 |
| 2.2.7 酶切片段与pET-28a载体的连接 | 第31页 |
| 2.2.8 重组克隆质粒的转化 | 第31页 |
| 2.2.9 转化克隆的PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.10 小量提取重组质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.11 目的蛋白的原核表达 | 第33页 |
| 2.3 结果分析 | 第33-40页 |
| 2.3.1 M949_0011基因PCR产物 | 第33-34页 |
| 2.3.2 M949_0011基因序列的生物信息学分析 | 第34-39页 |
| 2.3.3 pET28a-M949_0011原核表达质粒的构建和鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.4 重组质粒pET28a-M949_0011的蛋白表达 | 第40页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 鸭疫里默氏杆菌M949_0011基因生物学特性研究 | 第42-53页 |
| 3.1 材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 菌株、细胞系以及实验动物 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
| 3.2 方法 | 第43-46页 |
| 3.2.1 菌株的培养 | 第44页 |
| 3.2.2 测定RA野生株、M949_0011突变株半数致死量(LD_(50)) | 第44页 |
| 3.2.3 RA野生株、M949_0011突变株抗血清杀菌能力测定 | 第44页 |
| 3.2.4 LPS的提取、纯化及鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.5 RA野生株、M949_0011突变株粘附、入侵能力测定 | 第45页 |
| 3.2.6 RA野生株、M949_0011突变株的疏水性分析 | 第45页 |
| 3.2.7 RA野生株、M949_0011突变株的电镜观察 | 第45-46页 |
| 3.2.8 亚胺培南对生物被膜的影响 | 第46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.3.1 LD_(50)的测定结果 | 第46页 |
| 3.3.2 血清杀菌试验 | 第46-47页 |
| 3.3.3 LPS的提取、纯化鉴定试验 | 第47-48页 |
| 3.3.4 粘附、入侵试验 | 第48-49页 |
| 3.3.5 疏水性分析 | 第49页 |
| 3.3.6 RA野生株、M949_0011突变株的电镜观察 | 第49-50页 |
| 3.3.7 细菌非生物表面黏附能力 | 第50页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 鸭疫里默氏杆菌M949_0459基因的克隆表达及功能分析 | 第53-66页 |
| 4.1 材料 | 第53-55页 |
| 4.1.1 实验菌株及质粒 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第54页 |
| 4.1.4 引物设计与合成 | 第54-55页 |
| 4.2 方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 M949_0459基因扩增 | 第55页 |
| 4.2.2 M949_0459基因的生物信息学分析 | 第55页 |
| 4.2.3 胶回收PCR产物 | 第55页 |
| 4.2.4 双酶切M949_0459基因和pET-28a载体 | 第55-56页 |
| 4.2.5 目的片段与pET-28a载体的连接 | 第56页 |
| 4.2.6 重组克隆质粒的转化 | 第56页 |
| 4.2.7 转化克隆的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 4.2.8 小量提取重组质粒 | 第57页 |
| 4.2.9 目的蛋白的表达 | 第57页 |
| 4.2.10 药敏试验 | 第57页 |
| 4.2.11 实时定量荧光PCR | 第57-58页 |
| 4.3 结果分析 | 第58-64页 |
| 4.3.1 M949_0459基因PCR产物 | 第58-59页 |
| 4.3.2 M949_0459基因序列的生物信息学分析 | 第59-62页 |
| 4.3.3 pET28a-M949_0459原核表达质粒的构建和鉴定 | 第62页 |
| 4.3.4 重组质粒pET28a-M949_0459的蛋白表达 | 第62-63页 |
| 4.3.5 药敏试验 | 第63-64页 |
| 4.3.6 替加环素对M949_0459基因诱导作用 | 第64页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第75页 |
