| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 肿瘤血管生成 | 第10-12页 |
| 1.1.1 血管的生成 | 第10页 |
| 1.1.2 肿瘤血管的生成 | 第10-12页 |
| 1.2 血管新生为靶点的基因治疗研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 基因治疗 | 第12页 |
| 1.2.2 基因治疗载体系统 | 第12-13页 |
| 1.2.3 肿瘤基因治疗策略 | 第13-14页 |
| 1.2.4 肿瘤抗血管生成基因治疗 | 第14-15页 |
| 1.3 慢病毒载体在基因治疗中的应用 | 第15-18页 |
| 1.3.1 慢病毒载体系统的概述 | 第15-17页 |
| 1.3.2 肿瘤基因治疗中慢病毒载体的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 血小板因子4概述 | 第18-21页 |
| 1.4.1 PF4结构特征 | 第18页 |
| 1.4.2 生物学活性 | 第18-19页 |
| 1.4.3 PF4抗肿瘤血管生成机制 | 第19-21页 |
| 1.5 本课题研究思路 | 第21-23页 |
| 第二章 pLV-PF4~(47-70)-RGD慢病毒表达载体的构建 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第24页 |
| 2.1.4 培养基及溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2.1.5 引物合成 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 目的基因设计 | 第27页 |
| 2.2.2 pLV-PF4~(47-70)-RGD慢病毒表达载体构建流程 | 第27-29页 |
| 2.2.3 PF4~(47-70)-RGD基因片段的扩增 | 第29-32页 |
| 2.2.4 慢病毒载体pLV的扩增 | 第32页 |
| 2.2.5 pLV-PF4~(47-70)-RGD慢病毒表达载体的构建 | 第32-35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-38页 |
| 2.3.1 PF4~(47-70)-RGD基因的扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.2 慢病毒载体pLV的扩增 | 第36页 |
| 2.3.3 pLV-PF4~(47-70)-RGD慢病毒表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 慢病毒的包装 | 第39-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.1.1 细胞系与载体 | 第39页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.3 实验器材 | 第40页 |
| 3.1.4 培养基及溶液的配制 | 第40-41页 |
| 3.1.5 引物合成 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-48页 |
| 3.2.1 293T细胞的基础培养 | 第41-43页 |
| 3.2.2 慢病毒包装系统质粒的扩增 | 第43-45页 |
| 3.2.3 慢病毒的包装 | 第45-46页 |
| 3.2.4 慢病毒滴度的测定 | 第46-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-54页 |
| 3.3.1 慢病毒包装系统质粒的扩增 | 第48-51页 |
| 3.3.2 慢病毒滴度的检测 | 第51-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 稳定表达A549细胞系的建立与检测 | 第55-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-59页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第55页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第55页 |
| 4.1.3 实验器材 | 第55页 |
| 4.1.4 培养基及相关溶液的配制 | 第55-59页 |
| 4.1.5 引物合成 | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-66页 |
| 4.2.1 稳定表达A549细胞系的筛选 | 第59-60页 |
| 4.2.2 稳定表达A549细胞系的检测 | 第60-66页 |
| 4.3 实验结果 | 第66-69页 |
| 4.3.1 Bsd最佳筛选浓度的确定 | 第66页 |
| 4.3.2 基因水平检测蛋白表达结果 | 第66-68页 |
| 4.3.3 蛋白水平(Western blot)检测蛋白表达结果 | 第68-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 重组慢病毒体外生物学活性检测 | 第70-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 5.1.1 细胞系 | 第70页 |
| 5.1.2 主要实验试剂 | 第70页 |
| 5.1.3 实验器材 | 第70-71页 |
| 5.1.4 培养基的配置 | 第71页 |
| 5.2 实验方法 | 第71-72页 |
| 5.2.1 MTT法 | 第71-72页 |
| 5.2.2 HUVEC细胞小管形成实验 | 第72页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第72-75页 |
| 5.3.1 重组慢病毒和稳转A549细胞培养液对HUVEC增殖的影响 | 第72-73页 |
| 5.3.2 稳转A549细胞培养液对HUVEC细胞小管形成的影响 | 第73-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第六章 结论与展望 | 第76-78页 |
| 6.1 结论 | 第76页 |
| 6.2 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 发表论文 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
