| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略词中英文对照 | 第16-19页 |
| 引言 | 第19-23页 |
| 参考文献 | 第21-23页 |
| 第一部分 文献综述 | 第23-63页 |
| 第一章 MSTN基因研究概况 | 第23-33页 |
| 1 MSTN基因的发现 | 第23页 |
| 2 MSTN基因结构和定位 | 第23-25页 |
| 2.1 MSTN基因结构 | 第23-24页 |
| 2.2 MSTN染色体定位 | 第24-25页 |
| 3 MSTN基因的组织特异性 | 第25页 |
| 4 MSTN对肌肉发育的影响 | 第25-26页 |
| 5 MSTN基因的信号通路 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-33页 |
| 第二章 基因打靶技术研究进展 | 第33-45页 |
| 1 基因打靶技术 | 第33-36页 |
| 1.1 基因打靶原理 | 第33-34页 |
| 1.2 基因打靶载体 | 第34页 |
| 1.3 基因打靶策略 | 第34-35页 |
| 1.4 影响打靶效率的因素 | 第35-36页 |
| 2 基因打靶新技术 | 第36-39页 |
| 2.1 ZFN技术 | 第36-37页 |
| 2.2 TALEN技术 | 第37页 |
| 2.3 CRISPR-Cas9技术 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 第三章 RNAi研究进展 | 第45-63页 |
| 1 RNAi的发现过程 | 第45页 |
| 2 三种小RNA的发现及不同点 | 第45-46页 |
| 3 RNAi作用机制 | 第46-50页 |
| 3.1 siRNA诱导的PTGS | 第47页 |
| 3.2 miRNA诱导的PTGS | 第47-48页 |
| 3.3 siRNA诱导的TGS | 第48-49页 |
| 3.4 piRNA诱导的TGS | 第49-50页 |
| 4 siRNA相关的脱靶效应 | 第50-52页 |
| 4.1 miRNA样脱靶效应 | 第50页 |
| 4.2 免疫刺激 | 第50-51页 |
| 4.3 RNAi元件饱和 | 第51页 |
| 4.4 减少脱靶效应的策略 | 第51-52页 |
| 5 RNAi技术的应用 | 第52-54页 |
| 5.1 基因功能分析 | 第52页 |
| 5.2 细胞信号转导新途径的研究 | 第52-53页 |
| 5.3 基因治疗 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 第二部分 试验研究 | 第63-119页 |
| 第四章 靶向MSTN基因的RNAi载体构建及功能验证 | 第63-81页 |
| 1 材料与方法 | 第63-72页 |
| 1.1 试验材料 | 第63-65页 |
| 1.2 试验方法 | 第65-72页 |
| 2 结果 | 第72-76页 |
| 2.1 干扰载体pD-miRNA的构建与鉴定 | 第72-73页 |
| 2.2 过表达载体C1-MSTN的鉴定 | 第73页 |
| 2.3 干扰载体瞬时转染293FT细胞后荧光强度的分析 | 第73-75页 |
| 2.4 用qPCR方法检测干扰载体对靶基因的干扰效果 | 第75页 |
| 2.5 用western blot方法检测干扰载体对靶基因的干扰效果 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 第五章 利用RNAi抑制GFF细胞中MSTN基因的表达 | 第81-93页 |
| 1 材料与方法 | 第81-84页 |
| 1.1 试验材料 | 第81页 |
| 1.2 试验方法 | 第81-84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-88页 |
| 2.1 GFF细胞的形态观察 | 第84页 |
| 2.2 GFF细胞的性别鉴定 | 第84-85页 |
| 2.3 GFF细胞生长曲线绘制 | 第85页 |
| 2.4 Pre-miRNA干扰载体的鉴定 | 第85-86页 |
| 2.5 GFF细胞转染效率的检测 | 第86-87页 |
| 2.6 干扰载体瞬时转染GFF细胞对MSTN及IFN相关基因表达的影响 | 第87页 |
| 2.7 细胞抗性试验 | 第87-88页 |
| 2.8 干扰载体稳定转染GFF细胞对MSTN及IFN相关基因表达的影响 | 第88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第六章 利用RNAi抑制山羊骨骼肌卫星细胞中MSTN基因的表达 | 第93-101页 |
| 1 材料与方法 | 第93-95页 |
| 1.1 试验材料 | 第93页 |
| 1.2 试验方法 | 第93-95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-97页 |
| 2.1 山羊SMSC细胞的形态观察 | 第95页 |
| 2.2 山羊SMSC细胞成肌特性的鉴定 | 第95-96页 |
| 2.3 山羊SMSC细胞转染效率的计算 | 第96-97页 |
| 2.4 干扰载体瞬时转染SMSC细胞对MSTN基因表达的影响 | 第97页 |
| 3 讨论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-101页 |
| 第七章 山羊MSTN基因打靶载体的构建及鉴定 | 第101-109页 |
| 1 材料与方法 | 第101-103页 |
| 1.1 试验材料 | 第101页 |
| 1.2 试验方法 | 第101-103页 |
| 2 结果与分析 | 第103-105页 |
| 2.1 同源臂扩增 | 第103页 |
| 2.2 同源臂T-A克隆 | 第103-104页 |
| 2.3 3'同源臂与ploxPneo载体连接 | 第104-105页 |
| 2.4 5'同源臂与S-ploxP载体连接 | 第105页 |
| 2.5 打靶载体正负筛选标记的有效性检测 | 第105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 第八章 山羊MSTN基因敲除胎儿成纤维细胞系的构建 | 第109-119页 |
| 1 材料与方法 | 第109-112页 |
| 1.1 试验材料 | 第109-110页 |
| 1.2 试验方法 | 第110-112页 |
| 2 结果 | 第112-113页 |
| 2.1 细胞毒性试验 | 第112-113页 |
| 2.2 基因打靶效率计算 | 第113页 |
| 2.3 转染前准备 | 第113页 |
| 2.4 阳性细胞筛选结果 | 第113页 |
| 2.5 阳性细胞的PCR鉴定结果 | 第113页 |
| 3 讨论 | 第113-117页 |
| 3.1 基因打靶方式的选择 | 第113-115页 |
| 3.2 基因打靶细胞的选择 | 第115-116页 |
| 3.3 转染方法与条件的选择 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-119页 |
| 全文结论 | 第119-121页 |
| 创新点 | 第121-123页 |
| 进一步研究内容 | 第123-125页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第125-127页 |
| 附录 | 第127-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
