| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| ·CuZnSOD基因的研究进展 | 第12页 |
| ·CuZnSOD与肉质 | 第12-13页 |
| ·转基因动物的常规制备方法 | 第13-17页 |
| ·显微注射法 | 第13-14页 |
| ·逆转录病毒载体法 | 第14页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第14-15页 |
| ·体细胞核移植技术 | 第15-16页 |
| ·RNAi技术 | 第16页 |
| ·精子载体法 | 第16-17页 |
| ·磁性纳米颗粒作为基因载体的研究进展 | 第17-18页 |
| ·转基因的整合表达与拷贝数 | 第18-20页 |
| ·转基因在动物育种上的应用 | 第20-23页 |
| ·提高动物生长速度 | 第20-21页 |
| ·改善肉质 | 第21页 |
| ·改良动物产毛性能 | 第21-22页 |
| ·改变乳品质 | 第22页 |
| ·提高动物抗病能力 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 试验材料 | 第24-27页 |
| ·试验动物与样品采集 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第26页 |
| ·大肠杆菌DH5α 转化与克隆所用试剂 | 第26-27页 |
| ·蛋白质印迹用试剂 | 第27页 |
| ·主要数据库与生物软件 | 第27页 |
| 3 试验方法 | 第27-42页 |
| ·CuZnSOD转基因猪制备 | 第27-30页 |
| ·转化与摇菌 | 第27-28页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·无内毒素质粒的线性化处理 | 第29-30页 |
| ·磁性纳米颗粒介导精子转染 | 第30页 |
| ·F1代转基因猪的PCR检测与测序 | 第30-32页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·PCR反应 | 第31页 |
| ·基因片段的纯化回收 | 第31-32页 |
| ·基因片段的连接转化与测序 | 第32页 |
| ·F1代转基因猪不同组织CuZnSOD mRN A的表达检测 | 第32-35页 |
| ·总RNA提取 | 第32-34页 |
| ·反转录 | 第34页 |
| ·qRT-PCR反应 | 第34-35页 |
| ·F1代转基因猪不同组织CuZnSOD蛋白的western blot | 第35-38页 |
| ·总蛋白的提取 | 第35页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第35-36页 |
| ·制备SDS-PAGE凝胶 | 第36页 |
| ·蛋白变性与电泳 | 第36-37页 |
| ·转膜与封闭 | 第37页 |
| ·抗体孵育 | 第37页 |
| ·发光、显影与定影 | 第37-38页 |
| ·绝对定量PCR鉴定F1代转基因阳性猪外源基因拷贝数 | 第38-39页 |
| ·荧光定量PCR | 第38页 |
| ·标准曲线的建立 | 第38-39页 |
| ·F1代转基因猪肉质及抗氧化性能测定 | 第39-40页 |
| ·外源基因在F2代转基因猪的遗传与表达 | 第40-41页 |
| ·F2代转基因猪的PCR检测 | 第40页 |
| ·F2代转基因猪CuZnSOD mRN A的表达 | 第40页 |
| ·F2代转基因猪CuZnSOD蛋白的表达 | 第40-41页 |
| ·F2代转基因猪肉质及抗氧化性能测定 | 第41页 |
| ·F2代转基因猪血清生化指标分析 | 第41页 |
| ·数据统计分析 | 第41-42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-51页 |
| ·F1代转基因猪PCR检测及测序 | 第42-43页 |
| ·qRT-PCR检测F1代转基因猪CuZnSOD基因的表达 | 第43-44页 |
| ·Western blot检测F1代转基因猪CuZnSOD蛋白的表达 | 第44-45页 |
| ·F1代转基因阳性猪外源基因拷贝数的鉴定 | 第45-46页 |
| ·F1代转基因猪肉质与抗氧化性能测定结果 | 第46-47页 |
| ·外源基因在F2代转基因猪的遗传与表达分析 | 第47-49页 |
| ·F2代转基因猪的获得与PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·F2代转基因猪CuZnSOD mRN A的表达分析 | 第48页 |
| ·F2代转基因猪CuZnSOD蛋白的表达分析 | 第48-49页 |
| ·F2代转基因猪肉质与抗氧化性能测定结果 | 第49-50页 |
| ·F2代转基因猪血清生化指标测定结果 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| ·磁性纳米颗粒介导精子载体法制备转基因动物 | 第51页 |
| ·F1代CuZnSOD转基因猪的检测及拷贝数鉴定 | 第51-52页 |
| ·外源基因在F2代转基因猪的遗传与表达 | 第52页 |
| ·转基因对猪肉质及对F2代猪血清生化的影响 | 第52-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第66页 |
