| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| ·乳腺癌及其现状 | 第12页 |
| ·启动子 | 第12-19页 |
| ·核心启动子的结构及功能 | 第13-15页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第15-19页 |
| ·转录调控 | 第19-25页 |
| ·转录因子及其调控作用 | 第20-22页 |
| ·miRNA及其调控作用 | 第22-25页 |
| ·基因捕获技术 | 第25-29页 |
| ·研究背景 | 第25-27页 |
| ·基因陷阱的原理 | 第27-28页 |
| ·基因陷阱的特点 | 第28页 |
| ·启动子陷阱技术 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第29-30页 |
| 第二章 随机DNA片段库及SEAP阳性对照的构建 | 第30-48页 |
| 第一部分 随机DNA片段库的构建 | 第30-40页 |
| ·试验材料 | 第30-32页 |
| ·试验材料 | 第30页 |
| ·试验主要化学试剂 | 第30-31页 |
| ·试验主要仪器 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·耗材 | 第32页 |
| ·软件及网络资源 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-37页 |
| ·4T1细胞的复苏 | 第32-33页 |
| ·细胞的培养 | 第33页 |
| ·4T1细胞的基因组DNA提取 | 第33-34页 |
| ·总DNA的检测 | 第34页 |
| ·基因组DNA的双酶切及回收 | 第34-35页 |
| ·pCpGfree-basic载体的双酶切及回收 | 第35页 |
| ·构建基因组DNA与pCpGfree-basic载体的随机的质粒库 | 第35-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-40页 |
| ·4T1细胞基因组DNA提取 | 第37-38页 |
| ·pCpGfree-basic载体与基因组DNA双酶切 | 第38-39页 |
| ·随机的质粒库的构建及双酶切验证 | 第39-40页 |
| 第二部分 SEAP阳性对照载体的构建 | 第40-48页 |
| ·试验方法 | 第40-43页 |
| ·pEGFP-N1载体的CMV启动子引物设计 | 第40页 |
| ·pEGFP-N1启动子扩增 | 第40-41页 |
| ·构建pMD 18-T Simple/EGFP-CMV克隆载体 | 第41-42页 |
| ·双酶切pMD18-T Simple/EGFP-CMV克隆载体 | 第42页 |
| ·构建pCpGfree-basic/EGFP-CMV重组质粒 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-48页 |
| ·pEGFP-N1基因启动子CMV扩增 | 第43-44页 |
| ·pMD18-T Simple/EGFP-CMV菌落PCR以及酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·pMD18-T Simple/EGFP-CMV载体双酶切结果 | 第45页 |
| ·pCpGfree-basic/EGFP-CMV重组质粒菌落PCR以及酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·pCpGfree-basic/EGFP-CMV重组质粒测序鉴定结果 | 第46-48页 |
| 第三章 随机DNA片段库的筛选及阳性克隆的分析 | 第48-59页 |
| ·试验材料 | 第48-49页 |
| ·试验主要化学试剂 | 第48页 |
| ·试验主要仪器 | 第48-49页 |
| ·耗材 | 第49页 |
| ·软件及网络资源 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-51页 |
| ·细胞复苏 | 第49页 |
| ·细胞传代 | 第49页 |
| ·细胞铺板 | 第49-50页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第50页 |
| ·报告基因SEAP活性的检测 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-59页 |
| ·SEAP活性最高值的转染时间的确定 | 第51页 |
| ·阳性质粒的SEAP活性检测 | 第51-53页 |
| ·阳性质粒测序结果分析 | 第53-59页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第71页 |
