| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 注释说明清单 | 第13-17页 |
| 引言 | 第17-20页 |
| 第一部分 粉尘螨1类变应原T与B细胞表位嵌合基因的构建与表达 | 第20-46页 |
| 1 研究内容 | 第20-21页 |
| ·基因合成 | 第20页 |
| ·设计引物 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-28页 |
| ·主要试剂 | 第21-23页 |
| ·主要试剂配置 | 第23-28页 |
| 3 实验方法 | 第28-37页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第28页 |
| ·重组质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第30页 |
| ·菌落PCR、筛选阳性菌及测序 | 第30-31页 |
| ·Derf1,Derf1A,Derf1B蛋白的小量诱导表达 | 第31页 |
| ·Derf1,Derf1A,Derf1B蛋白的SDS-PAGE分析 | 第31-33页 |
| ·Derf1,Derf1A,Derf1B蛋白的大量诱导表达 | 第33页 |
| ·Derf1,Derf1A,Derf1B蛋白的纯化及鉴定 | 第33-34页 |
| ·纯化产物的免疫印记(western blot)分析 | 第34页 |
| ·Bradford's法定量蛋白浓度 | 第34-37页 |
| 4 结果 | 第37-44页 |
| ·重组融合表位基因Derf1A、Derf1B的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第38-39页 |
| ·Derf1,Derf1A,Derf1B蛋白的SDS-PAGE分析 | 第39-41页 |
| ·Derf1,Derf1A,Derf1B重组蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·纯化产物的免疫印迹(Western blot)鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第43页 |
| ·Derf1B与Derf1A对粉尘螨过敏患者的血清IgE结合力 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-46页 |
| 第二部分 Derf1A、Derf1B嵌合蛋白对哮喘小鼠免疫治疗的效果分析 | 第46-59页 |
| 1 研究内容 | 第46-47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-48页 |
| ·材料与试剂 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要试剂配制 | 第47-48页 |
| 3 实验步骤 | 第48-51页 |
| ·实验动物分组 | 第48页 |
| ·建立哮喘小鼠模型 | 第48-49页 |
| ·特异性免疫治疗 | 第49页 |
| ·实验标本取材及指标检测 | 第49-50页 |
| ·血清特异性IgE和IgG2a抗体含量的测定 | 第49页 |
| ·脾细胞培养 | 第49-50页 |
| ·肺组织切片HE染色 | 第50页 |
| ·支气管肺泡灌洗液(BALF)中特异性细胞因子检测 | 第50页 |
| ·统计学方法 | 第50-51页 |
| 4 结果 | 第51-57页 |
| ·各组小鼠症状与体征的改变 | 第51页 |
| ·ELISA法测定血清中特异性IgE和IgG2a的含量 | 第51-52页 |
| ·ELISA法测定小鼠脾细胞培养上清液中抗原特异性IL-5和IFN-γ的含量 | 第52-54页 |
| ·肺组织切片HE染色 | 第54页 |
| ·ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中特异性细胞因子IL-5和IFN-γ的含量 | 第54-55页 |
| ·BALF中细胞分类计数 | 第55-57页 |
| 5 讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 | 第69页 |
