| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 插图和附表清单 | 第12-13页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| ·衣原体研究进展 | 第15-24页 |
| ·衣原体概述 | 第15-16页 |
| ·衣原体分类 | 第16页 |
| ·衣原体流行情况 | 第16-17页 |
| ·衣原体蛋白组学研究进展 | 第17-21页 |
| ·衣原体检测方法研究进展 | 第21-24页 |
| ·衣原体疫苗研究进展 | 第24-30页 |
| ·全菌疫苗 | 第24-25页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第25-26页 |
| ·DNA疫苗 | 第26-27页 |
| ·载体疫苗 | 第27-29页 |
| ·多价疫苗 | 第29-30页 |
| ·质粒缺失疫苗 | 第30页 |
| ·衣原体蛋白相关模式受体和信号通路研究进展 | 第30-31页 |
| ·研究目的和意义 | 第31-32页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第32-34页 |
| ·研究内容 | 第32-33页 |
| ·技术路线 | 第33-34页 |
| 第二章 霍乱弧菌载体亚单位疫苗rVCG-Pmp18N的构建 | 第34-54页 |
| 摘要 | 第34-35页 |
| ·试验材料 | 第35-40页 |
| ·菌株与载体 | 第35-37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·试验用主要溶液的配制 | 第37-39页 |
| ·主要仪器和设备 | 第39-40页 |
| ·试验方法 | 第40-47页 |
| ·衣原体总DNA提取 | 第40页 |
| ·Pmp18N基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·PCR产物纯化(过柱纯化法) | 第41页 |
| ·切胶纯化DNA | 第41-42页 |
| ·PCR产物的酶切、连接 | 第42页 |
| ·热激法转化步骤 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的小提与鉴定 | 第43-44页 |
| ·霍乱弧菌V912化学感受态细胞的制备方法 | 第44页 |
| ·质粒pDKL01化学转化到霍乱弧菌V912感受态细胞 | 第44-45页 |
| ·电转化感受态细胞V912(pDKL01)的制备 | 第45页 |
| ·电转重组质粒pST-18N到V912(pDKL01)感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·重组rVCG-Pmp18N的Western Blot鉴定 | 第46页 |
| ·重组rVCG-Pmp18N的裂解实验 | 第46-47页 |
| ·rVCG-Pmp18N菌种保存 | 第47页 |
| ·重组rVCG-Pmp18N的大量制备 | 第47页 |
| ·纯粹性检验 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·重组质粒pST-18N的构建与鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组菌rVCG-Pmp18N的构建 | 第48-49页 |
| ·疫苗rVCG-Pmp18N的大量制备 | 第49-51页 |
| ·重组疫苗rVCG-Pmp18N的Western Blot鉴定 | 第51页 |
| ·重组疫苗rVCG-Pmp18N的纯粹性检验 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第三章 霍乱弧菌载体疫苗rVCG-Pmp18N的免疫效力评价 | 第54-73页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| ·试验材料 | 第55-57页 |
| ·菌株、细胞和实验动物 | 第55页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第55-56页 |
| ·试验用主要溶液的配制 | 第56-57页 |
| ·主要仪器和设备 | 第57页 |
| ·试验方法 | 第57-63页 |
| ·实验小鼠的免疫 | 第57-58页 |
| ·实验小鼠样品采集 | 第58页 |
| ·实验小鼠攻毒及生殖道拭子采集 | 第58页 |
| ·BGMK细胞培养 | 第58-59页 |
| ·生殖道拭子感染BGMK细胞 | 第59-60页 |
| ·衣原体IFU的荧光染色检测方法 | 第60页 |
| ·T淋巴细胞增殖实验 | 第60-62页 |
| ·ELISA检测血清和生殖道灌洗液抗体 | 第62页 |
| ·T淋巴细胞上清中细胞因子的检测 | 第62-63页 |
| ·统计学分析 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-70页 |
| ·T淋巴细胞增殖结果 | 第63-64页 |
| ·血清抗体水平的检测结果 | 第64-66页 |
| ·生殖道灌洗液抗体水平的检测结果 | 第66-68页 |
| ·T淋巴细胞细胞因子分泌水平 | 第68-69页 |
| ·小鼠攻毒保护试验结果 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第四章 Pmp18N蛋白对DC递呈功能的影响和作用机制研究 | 第73-96页 |
| 摘要 | 第73-74页 |
| ·试验材料 | 第74-76页 |
| ·细胞系 | 第74页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第74-75页 |
| ·试验用主要溶液的配制 | 第75-76页 |
| ·主要仪器和设备 | 第76页 |
| ·试验方法 | 第76-81页 |
| ·蛋白样品内毒素的去除及定量检测 | 第76-77页 |
| ·JAW Ⅱ细胞培养方法 | 第77-78页 |
| ·流式细胞术表面抗原染色方法 | 第78页 |
| ·流式细胞术胞内抗原染色方法 | 第78-79页 |
| ·细胞总蛋白的提取方法 | 第79页 |
| ·细胞核蛋白的提取方法 | 第79-80页 |
| ·胞内信号分子的Western Blot鉴定 | 第80页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察NF-κB p65分子迁移 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-92页 |
| ·重组Pmp18N蛋白样品内毒素浓度的测定 | 第81页 |
| ·Pmp18N蛋白活化DC细胞、促进DC细胞的成熟 | 第81-82页 |
| ·Pmp18N诱导DC细胞因子的表达 | 第82-83页 |
| ·Pmp18N对DC细胞受体表达的影响 | 第83-84页 |
| ·TLR4介导的NF-κB信号通路 | 第84-87页 |
| ·NLRP3介导的Inflammasomes激活 | 第87页 |
| ·不同佐剂或载体对DC递呈功能的比较 | 第87-92页 |
| ·讨论 | 第92-95页 |
| ·DC细胞成熟及递呈功能增强 | 第92页 |
| ·细胞因子进一步加强DC细胞成熟及递呈功能 | 第92-93页 |
| ·DC细胞NF-κB信号通路与NLRP3 Inflammasome的激活 | 第93-95页 |
| ·体外实验免疫佐剂的筛选 | 第95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 第五章 结论 | 第96-97页 |
| 第六章 创新点 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113-114页 |
