| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 英文縮略词一览表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-37页 |
| ·禽流感的危害和现有的防治手段 | 第11-18页 |
| ·禽流感病毒概述 | 第12-16页 |
| ·禽流感的预防和治疗手段 | 第16-18页 |
| ·母鸡特殊的生殖系统及鸡胚早期发育的特点 | 第18-23页 |
| ·母鸡特殊的生殖系统及鸡蛋的形成 | 第18-19页 |
| ·鸡蛋的结构 | 第19-20页 |
| ·鸡胚的发育过程 | 第20-22页 |
| ·鸡胚发育早期原始生殖细胞的迁移 | 第22-23页 |
| ·转基因鸡技术研究进展 | 第23-32页 |
| ·受精卵显微注射法 | 第23-24页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第24-26页 |
| ·原始生殖细胞法 | 第26-28页 |
| ·病毒载体法 | 第28-30页 |
| ·转基因鸡技术展望 | 第30-32页 |
| ·应用转基因鸡技术进行抗病育种的研究进展 | 第32-33页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| ·实验流程图 | 第35-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-61页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·试剂和耗材 | 第37页 |
| ·细胞株、病毒株和实验动物 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第38页 |
| ·酶、抗体和试剂盒 | 第38-39页 |
| ·慢病毒载体 | 第39页 |
| ·实验仪器和设备 | 第39-41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41-44页 |
| ·细胞培养所需试剂 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备所需试剂的配制 | 第41-42页 |
| ·质粒DNA提取所需试剂的配制 | 第42页 |
| ·基因组DNA提取所需试剂的配制 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需试剂的配制 | 第42页 |
| ·总蛋白质提取所需试剂的配制 | 第42-43页 |
| ·Western blot 所需试剂的配制 | 第43-44页 |
| ·ELISA所需试剂的配制 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-61页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第44-45页 |
| ·细胞培养及传代 | 第45页 |
| ·细胞的稳定转染 | 第45-46页 |
| ·细胞的瞬时转染 | 第46页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·DNA连接反应 | 第47页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第47页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第47-48页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第48页 |
| ·PCR和酶切产物的切胶回收 | 第48-49页 |
| ·DF-1细胞基因组的提取 | 第49页 |
| ·稳定整合siRNA NP604基因的DF-1细胞的PCR鉴定 | 第49页 |
| ·scFv的瞬时表达western blot检测 | 第49-50页 |
| ·AIV FJ13病毒在DF-1细胞中的培养 | 第50页 |
| ·AIV FJ13病毒CCID_(50)的测定 | 第50-51页 |
| ·PEG法沉淀提纯病毒 | 第51页 |
| ·BCA法蛋白质浓度的测定 | 第51页 |
| ·DF-1所表达的scFv的病毒结合活性的Indirect-ELISA检测 | 第51-52页 |
| ·AIV FJ13病毒血凝效价的测定 | 第52页 |
| ·AIV FJ13病毒RNA的提取及反转录合成cDNA | 第52-53页 |
| ·病毒含量的Real-time PCR定量分析 | 第53页 |
| ·HIV-1型慢病毒载体构建策略 | 第53-54页 |
| ·慢病毒的包装 | 第54-55页 |
| ·慢病毒的浓缩 | 第55页 |
| ·孔稀释法测定慢病毒的滴度 | 第55页 |
| ·慢病毒载体显微注射鸡胚血管制备转基因鸡的方法 | 第55-56页 |
| ·雏鸡的饲养 | 第56-57页 |
| ·鸡翅根静脉采血法 | 第57页 |
| ·成年公鸡人工采精和为母鸡受精的方法 | 第57页 |
| ·鸡血液和精液基因组的提取 | 第57-58页 |
| ·雏鸡血液基因组PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·Real-time PCR检测外源基因在公鸡精液中的拷贝数 | 第59页 |
| ·鸡血液及组织中总RNA的提取及反转录合成cDNA | 第59页 |
| ·荧光显微镜观察雏鸡各组织中EGFP蛋白的表达 | 第59-60页 |
| ·鸡组织总蛋白的提取 | 第60页 |
| ·数据统计学分析 | 第60-61页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第61-85页 |
| ·抗AIV H5N1的siRNA与scFv基因在DF-1细胞中的表达及功能验证 | 第61-69页 |
| ·鸡胚成纤维细胞系DF-1稳定表达siRNA NP-604细胞株的筛选 | 第62-63页 |
| ·scFvs在DF-1细胞中瞬时表达的检测 | 第63-64页 |
| ·scFvs病毒结合活性的间接ELISA检测结果 | 第64-65页 |
| ·scFvl在NP-604细胞中瞬时表达的检测 | 第65页 |
| ·不同转染细胞上清中病毒的滴度的比较 | 第65-66页 |
| ·Real-time PCR对比不同转染细胞中病毒的增殖 | 第66-68页 |
| ·小结与讨论 | 第68-69页 |
| ·抗AIV H5N1的siRNA与scFv慢病毒载体的构建及慢病毒包装 | 第69-74页 |
| ·特异性抗AIV H5N1的siRNA慢病毒载体的构建及慢病毒包装 | 第69页 |
| ·特异性抗AIV H5N1的scFv慢病毒载体的构建及慢病毒包装 | 第69-72页 |
| ·小结与讨论 | 第72-74页 |
| ·胚胎血管微注射慢病毒载体法制备特异性抗AIV H5N1转基因鸡 | 第74-85页 |
| ·胚胎血管显微注射慢病毒后孵化出的F0代雏鸡血液基因组PCR检测结果 | 第74-76页 |
| ·阳性雏鸡血液中目的基因转录的RT-PCR检测 | 第76-77页 |
| ·胚胎血管显微注射siRNA NP-604慢病毒组阳性雏鸡不同组织中绿色荧光蛋白EGFP表达检测 | 第77-80页 |
| ·胚胎血管显微注射scFv慢病毒组阳性雏鸡血液中scFv蛋白表达检测 | 第80页 |
| ·阳性嵌合体公鸡精液基因组DNA PCR检测 | 第80-81页 |
| ·Real-time PCR检测阳性嵌合体公鸡精液基因组中目的基因的拷贝数 | 第81-82页 |
| ·血管显微注射慢病毒阳性嵌合体公鸡F1代雏鸡的筛选 | 第82-83页 |
| ·小结与讨论 | 第83-85页 |
| 第四章 结论与展望 | 第85-87页 |
| ·结论 | 第85页 |
| ·展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 附录 | 第99-110页 |
| 作者简历 | 第110页 |
