| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| ·苜蓿耐牧性研究进展 | 第11-15页 |
| ·植物耐牧性 | 第11页 |
| ·苜蓿耐牧性相关形态学特征 | 第11-12页 |
| ·苜蓿耐牧性相关生理学特性 | 第12-13页 |
| ·苜蓿耐牧性鉴定评价研究进展 | 第13-14页 |
| ·苜蓿耐牧性品种选育 | 第14-15页 |
| ·植物基因克隆技术及其在黄花苜蓿中的应用 | 第15-18页 |
| ·同源序列技术 | 第15-16页 |
| ·位图克隆 | 第16-17页 |
| ·转座子标签技术 | 第17页 |
| ·DDRT-PCR | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交 | 第18页 |
| ·FLS、Bcs1、I2H基因简述 | 第18-21页 |
| ·黄酮醇合成酶(FLS)基因 | 第18-19页 |
| ·线粒体伴侣(Bcs1)基因 | 第19-20页 |
| ·异黄酮-2-羟化酶(I2H)基因 | 第20-21页 |
| ·研究目的及意义 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·植物材料及处理 | 第21页 |
| ·主要菌株、试剂和试剂盒 | 第21-22页 |
| ·黄花苜蓿黄酮醇合成酶MfFLS1基因的克隆 | 第22-26页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·MfFLS1基因的RT-PCR扩增 | 第22-24页 |
| ·RT-PCR产物的胶回收 | 第24页 |
| ·MfFLS1基因的连接转化 | 第24-25页 |
| ·菌落PCR快速检测 | 第25页 |
| ·重组质粒DNA的提取与检测 | 第25-26页 |
| ·序列分析 | 第26页 |
| ·黄花苜蓿MfFLS1基因的表达分析 | 第26-28页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·植物材料处理 | 第27页 |
| ·RNA提取 | 第27页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第27页 |
| ·MfFLS1基因半定量RT-PCR表达分析 | 第27-28页 |
| ·黄花苜蓿MfFLS1基因表达载体的构建及遗传转化烟草 | 第28-32页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第28-30页 |
| ·根癌农杆菌的转化与鉴定 | 第30-31页 |
| ·根癌农杆菌介导烟草遗传转化 | 第31-32页 |
| ·黄花苜蓿线粒体伴侣基因MfBcs1的克隆 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·MfBcs1基因的RT-PCR扩增 | 第32页 |
| ·黄花苜蓿异黄酮-2-羟化酶MfI2H基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·MfI2H基因的RT-PCR扩增 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-50页 |
| ·MfFLS1基因的克隆及序列分析 | 第33-38页 |
| ·植物总RNA提取 | 第33页 |
| ·FLS基因的克隆及序列分析 | 第33-35页 |
| ·MfFLS1基因疏水性分析及跨膜区域预测 | 第35-36页 |
| ·MfFLS1蛋白二级结构预测及亚细胞定位 | 第36页 |
| ·遗传距离与分子进化树 | 第36-38页 |
| ·黄花苜蓿MfFLS1基因的表达分析 | 第38-40页 |
| ·植物总RNA结果检测 | 第38页 |
| ·半定量RT-PCR循环次数 | 第38-39页 |
| ·黄花苜蓿不同器官中MfFls1基因表达分析 | 第39-40页 |
| ·黄花苜蓿MfFLS1基因表达载体的构建及遗传转化烟草 | 第40-42页 |
| ·MfFLS1完整开放阅读框的分离 | 第40页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第41页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第41-42页 |
| ·黄花苜蓿线粒体伴侣MfBcs1基因的克隆及序列分析 | 第42-46页 |
| ·线粒体伴侣Bcs1基因的分离 | 第42-43页 |
| ·序列分析 | 第43-44页 |
| ·氨基酸亲水性及跨膜结构的分析 | 第44-45页 |
| ·分子进化树 | 第45-46页 |
| ·MfI2H基因的克隆及序列分析 | 第46-50页 |
| ·MfI2H基因的克隆 | 第46页 |
| ·目的基因的序列分析 | 第46-47页 |
| ·基因序列的同源性分析 | 第47-48页 |
| ·疏水性与跨膜区域分析 | 第48-49页 |
| ·遗传距离与分子树构建 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-56页 |
| ·黄花苜蓿耐牧相关基因的结构特征 | 第50-51页 |
| ·MfFLS1基因结构特征 | 第50页 |
| ·MfBcs1基因结构特征 | 第50-51页 |
| ·MfI2H基因结构特征 | 第51页 |
| ·黄花苜蓿耐牧机理初探 | 第51-54页 |
| ·MfFLS1基因对放牧胁迫的应答机理初探 | 第51-52页 |
| ·MfBcs1基因对放牧胁迫的应答机理初探 | 第52-53页 |
| ·MfI2H基因对放牧胁迫的应答机理初探 | 第53页 |
| ·MfFLS1、MfBcs1、MfI2H在响应放牧胁迫中的协同作用 | 第53-54页 |
| ·荧光半定量RT-PCR技术与MfFLS1基因的表达分析 | 第54-55页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
