| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 部分缩略词 | 第18-19页 |
| 文献综述 | 第19-37页 |
| 1 植物组织培养的意义及研究现状 | 第19页 |
| 2 麻类植物组织培养研究 | 第19-20页 |
| 3 黄麻组织培养研究 | 第20-21页 |
| 4 植物纤维素生物合成研究进展 | 第21-32页 |
| ·纤维素结构及其合成途径 | 第21-26页 |
| ·纤维素的结构 | 第21-22页 |
| ·纤维素的体外合成研究 | 第22页 |
| ·植物纤维素生物合成途径研究 | 第22-26页 |
| ·植物纤维素合成酶基因研究进展 | 第26-27页 |
| ·植物纤维素合成酶基因的发现 | 第26页 |
| ·植物纤维素合成酶及其基因的结构 | 第26-27页 |
| ·植物纤维素合酶超家族概述 | 第27-28页 |
| ·纤维素合成酶家族 | 第28页 |
| ·类纤维素合酶家族 | 第28页 |
| ·参与纤维素合成的酶类及基因 | 第28-29页 |
| ·纤维素合成其它重要酶-尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 | 第29-32页 |
| ·UGPase结构及功能 | 第29-30页 |
| ·UGPase基因研究进展 | 第30-32页 |
| 5 木质素的结构及其功能 | 第32-33页 |
| 6 木质素的生物合成 | 第33-34页 |
| ·木质素合成的甲基化反应 | 第34页 |
| ·咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT)研究概况 | 第34页 |
| 7 本论文的立项依据和研究的意义 | 第34-36页 |
| 8 研究技术路线 | 第36-37页 |
| 第一章 黄麻高效再生和农杆菌介导遗传转化体系的优化 | 第37-55页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-38页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·菌株和载体 | 第37-38页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-42页 |
| ·无菌种苗的获取 | 第38页 |
| ·不同外植体的制备方法 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·培养条件 | 第39页 |
| ·培养过程 | 第39页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第39页 |
| ·愈伤组织的增值分化和不定芽诱导 | 第39页 |
| ·再生苗的生根 | 第39页 |
| ·再生苗的田间移栽 | 第39页 |
| ·农杆菌介导遗传转化茎尖 | 第39-40页 |
| ·外植体准备和农杆菌培养 | 第39-40页 |
| ·遗传转化操作步骤 | 第40页 |
| ·头孢霉素抑制农杆菌的敏感性试验 | 第40页 |
| ·卡那霉素和潮霉素对茎尖选择压的确定 | 第40页 |
| ·农杆菌介导遗传转化率相关因素的优化 | 第40-41页 |
| ·外植体预培养 | 第40页 |
| ·农杆菌菌液浓度 | 第40页 |
| ·添加农杆菌诱导物乙酰丁香通 | 第40-41页 |
| ·菌液的侵染时间 | 第41页 |
| ·农杆菌介导的黄麻茎尖GUS基因瞬时表达 | 第41页 |
| ·转基因植株分子生物学鉴定 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-53页 |
| ·不同的外植体之间愈伤诱导率的差异 | 第42-43页 |
| ·愈伤组织增值分化和直接诱导产生不定芽 | 第43-46页 |
| ·不同激素对再生芽生根的影响 | 第46-48页 |
| ·抑菌剂对子叶节不定芽诱导率的影响 | 第48-49页 |
| ·卡那霉素和潮霉素对子叶节选择压的确定 | 第49页 |
| ·农杆菌介导遗传转化各因素的优化 | 第49-52页 |
| ·GUS基因瞬时表达测定遗传转化率 | 第49-50页 |
| ·外植体预培养时间对转化率的影响 | 第50-51页 |
| ·菌液浓度对转化率的影响 | 第51页 |
| ·农杆菌侵染时间对转化率的影响 | 第51-52页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)对转化率的影响 | 第52页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第二章 黄麻尿苷二磷酸焦磷酸化酶(UGPase)基因克隆与功能鉴定 | 第55-75页 |
| 1 材料与试剂 | 第55-57页 |
| ·植物材料 | 第55-57页 |
| ·菌株和载体 | 第55-56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·所用引物 | 第56-57页 |
| 2 实验方法 | 第57-63页 |
| ·黄麻总RNA的提取 | 第57-58页 |
| ·UGPase基因全长cDNA片段克隆 | 第58-60页 |
| ·UGPase基因中间片段克隆 | 第58页 |
| ·UGPase基因5’和3’端片段克隆 | 第58-60页 |
| ·UGPase基因全长cDNA的克隆 | 第60页 |
| ·UGPase基因生物信息学分析 | 第60页 |
| ·RT-PCR分析UGPase基因时空表达模式 | 第60页 |
| ·UGPase基因过表达载体构建及转化拟南芥 | 第60-61页 |
| ·转基因拟南芥后代植株鉴定 | 第61-62页 |
| ·转基因拟南芥形态学观察,纤维素和木质素含量测定 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-73页 |
| ·黄麻茎皮中高质量RNA的提取 | 第63-64页 |
| ·UGPase基因全长cDNA片段克隆 | 第64-65页 |
| ·UGPase基因生物信息学分析 | 第65-69页 |
| ·UGPase基因时空表达分析 | 第69-70页 |
| ·UGPase基因过表达载体构建及验证 | 第70-71页 |
| ·转UGPase基因的拟南芥鉴定 | 第71-72页 |
| ·转基因拟南芥形态学观察,纤维素和木质素含量分析 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| 第三章黄麻纤维素合成酶基因(OrCmj/)基因克隆及转化拟南芥研究 | 第75-87页 |
| 1 材料与方法 | 第75-78页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76-78页 |
| ·黄麻韧皮总RNA提取及引物设计 | 第76页 |
| ·黄麻纤维素合成酶基因cDNA片段克隆 | 第76-77页 |
| ·黄麻纤维素合成酶基因cDNA片段生物信息学和表达分析 | 第77页 |
| ·黄麻纤维素合成酶基因反义载体构建及转化拟南芥 | 第77页 |
| ·转基因拟南芥鉴定和拟南芥AtCes10基因表达分析 | 第77-78页 |
| ·转基因拟南芥形态学观察和纤维素含量测定 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-85页 |
| ·黄麻纤维素合成酶基因cDNA克隆 | 第78-79页 |
| ·黄麻纤维素合成酶基因cDNA生物信息学分析及表达分析 | 第79-83页 |
| ·转基因拟南芥鉴定和拟南芥AtCes10基因表的分析 | 第83-84页 |
| ·拟南芥形态学观察和纤维素含量测定 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第四章 黄麻咖啡酰-辅酶A-O-甲基转移酶基因克隆与功能鉴定 | 第87-106页 |
| 1 材料与试剂 | 第87-89页 |
| ·植物材料 | 第87页 |
| ·菌株和载体 | 第87页 |
| ·主要试剂 | 第87-88页 |
| ·所用引物 | 第88-89页 |
| 2 实验方法 | 第89-94页 |
| ·黄麻总RNA的提取 | 第89页 |
| ·CCoAOMT基因全长cDNA片段克隆 | 第89-92页 |
| ·CCoAOMT基因中间片段克隆 | 第89-90页 |
| ·CCoAOMT基因5’和3’端片段克隆 | 第90-92页 |
| ·CCoAOMT基因全长cDNA的克隆 | 第92页 |
| ·CCoAOMT基因生物信息学分析 | 第92页 |
| ·RT-PCR分析CCoAOMT基因时空表达模式 | 第92页 |
| ·CCoAOMT基因过表达载体构建及转化拟南芥 | 第92-93页 |
| ·转基因拟南芥后代植株鉴定 | 第93-94页 |
| ·转基因拟南芥形态学观察,木质素含量测定 | 第94页 |
| 3 结果与分析 | 第94-104页 |
| ·CCoAOMT基因全长cDNA片段克隆 | 第94-96页 |
| ·CCoAOMT基因生物信息学分析 | 第96-100页 |
| ·CCoAOMT基因不同组织中表达分析 | 第100页 |
| ·CCoAOMT基因过表达载体构建及验证 | 第100-102页 |
| ·转CCoAOMT基因的拟南芥鉴定 | 第102页 |
| ·转基因拟南芥形态学观察,木质素含量分析 | 第102-104页 |
| 4 讨论 | 第104-106页 |
| 第五章 尿甘酸二磷酸焦磷酸化酶(UGPase)基因遗传转化黄麻研究 | 第106-112页 |
| 1 材料与试剂 | 第106-107页 |
| ·植物材料 | 第106页 |
| ·菌株和载体 | 第106页 |
| ·主要试剂 | 第106页 |
| ·所用引物 | 第106-107页 |
| 2 实验方法 | 第107-110页 |
| ·过量表达载体转化黄麻子叶节 | 第107-108页 |
| ·转基因拟南芥后代植株鉴定 | 第108-109页 |
| ·转基因黄麻株高和韧皮纤维素含量测定 | 第109-110页 |
| 3 结果与分析 | 第110-111页 |
| ·转基因黄麻分子生物学鉴定 | 第110页 |
| ·转基因植株高度和纤维素含量分析 | 第110-111页 |
| 4 讨论 | 第111-112页 |
| 第六章黄麻dToilGWT基因RNAi和人工MiRNA沉默载体构建及转化黄麻研究 | 第112-123页 |
| 1 材料与试剂 | 第112-113页 |
| ·植物材料 | 第112页 |
| ·菌株和载体 | 第112-113页 |
| ·主要试剂 | 第113页 |
| ·所用引物 | 第113页 |
| 2 实验方法 | 第113-117页 |
| ·韧皮部特异启动子验证 | 第113-115页 |
| ·韧皮部特异启动子驱动GUS基因载体构建 | 第113-114页 |
| ·特异启动子驱动GUS基因载体转化烟草 | 第114页 |
| ·GUS基因活性检测 | 第114-115页 |
| ·RNA干扰载体构建 | 第115页 |
| ·人工MiRNA定向沉默载体构建 | 第115-116页 |
| ·RNA干扰载体和人工MiRNA定向沉默载体转化黄麻 | 第116页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第116-117页 |
| 3 结果与分析 | 第117-120页 |
| ·韧皮部特异启动子载体构建 | 第117-118页 |
| ·GUS基因染色结果分析 | 第118-119页 |
| ·RNA干扰载体和人工MiRNA定向沉默载体的构建与验证 | 第119-120页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第120页 |
| 4 讨论 | 第120-123页 |
| 第七章 结论和创新点 | 第123-127页 |
| 1 本论文研究的主要结论 | 第123-125页 |
| 2 本论文的创新点 | 第125-126页 |
| 3 下一步工作展望 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-146页 |
| 附表1 常用实验方法 | 第146-149页 |
| 附表2 标准曲线 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第151页 |
