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中药活性组分的细胞膜色谱筛选和靶标鉴定方法学研究

摘要第1-10页
Abstract第10-13页
第0章 引言第13-20页
   ·目前中药活性组分研究的关键科学问题第13-14页
   ·细胞膜色谱技术用于中药活性组分和靶标研究的现状及发展第14-16页
   ·细胞膜色谱应用于中药活性组分研究存在的方法学问题第16-18页
   ·问题的对策和本课题的研究思路第18-20页
第1章 细胞膜色谱技术的系统方法学考察和柱效优化研究第20-30页
   ·引言第20-21页
   ·实验部分第21-23页
     ·试剂和材料第21页
     ·细胞培养第21页
     ·HSCT6 细胞膜色谱模型和 SMMC7721 细胞膜色谱模型的建立第21-22页
     ·细胞破碎条件的优化第22页
     ·装柱用细胞膜量的优化第22页
     ·细胞膜色谱柱柱效优化第22页
     ·细胞膜色谱分析第22-23页
   ·结果和讨论第23-29页
     ·细胞破碎度的优化第23-24页
     ·细胞膜用量的优化第24-25页
     ·细胞膜色谱模型的选择性和重现性验证第25-27页
     ·细胞膜色谱柱效优化第27-29页
   ·本章小结第29-30页
第2章 全二维 HepG2 细胞膜色谱整体柱飞行时间质谱系统的构建及其应用第30-45页
   ·引言第30-31页
   ·材料与方法第31-36页
     ·试剂与药材第31页
     ·制备药材提取液第31页
     ·细胞培养第31-32页
     ·建立 HepG2 肝癌细胞膜色谱模型第32页
     ·全二维细胞膜色谱-整体柱反相色谱系统的建立第32-34页
     ·全二维系统实验第34-35页
     ·全二维系统选择性的考察第35页
     ·竞争置换模型的考察第35页
     ·阳性药和潜在活性化合物对 HepG2 肝癌细胞增殖的影响第35-36页
   ·结果与讨论第36-44页
     ·全二维系统选择性的考察第36-37页
     ·全二维系统筛选中药活性组分第37-40页
     ·竞争置换实验第40-43页
     ·药物对 HepG2 肝癌细胞增殖的影响第43-44页
   ·本章小结第44-45页
第3章 正常/衰竭心肌细胞膜色谱比较分析系统的构建及其在中药附子和四逆汤活性组分筛选中的应用第45-72页
   ·引言第45-47页
   ·材料与方法第47-53页
     ·试剂与材料第47页
     ·仪器设备第47页
     ·样品制备和标准溶液配制第47-48页
     ·动物实验第48页
     ·血流动力学评估第48页
     ·正常心肌/细胞膜色谱(NM/CMC)和衰竭心肌/细胞膜色谱(FM/CMC)模型制备第48-49页
     ·全二维比较细胞膜色谱分析系统第49-51页
     ·H9c2 细胞活力测定第51页
     ·细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)水平的测定第51-52页
     ·分子对接研究第52页
     ·竞争置换实验第52页
     ·细胞凋亡和死亡的流式细胞仪检测第52页
     ·蛋白印迹分析(Western bloting)第52-53页
   ·结果和讨论第53-71页
     ·附子对阿霉素诱导的心肌病的心脏保护作用第53-54页
     ·细胞膜色谱柱制备过程的优化第54-55页
     ·全二维比较细胞膜色谱/整体柱/飞行时间质谱分析系统的专属性考察第55-57页
     ·应用于附子和四逆汤抗心衰活性组分的筛选第57-64页
     ·TALA 对 H9c2 细胞活力和细胞膜的完整性的影响第64-66页
     ·TALA 和 14乙酰 TALA 的结合靶标分析第66-69页
     ·TALA 与 K+通道阻滞剂 4AP 的协同作用第69-71页
   ·本章小结第71-72页
第4章 四逆汤活性组分作用靶标群的鉴定研究第72-97页
   ·引言第72页
   ·材料与方法第72-76页
     ·试剂和材料第72-73页
     ·大鼠心梗模型构建和心功能评价第73页
     ·组织蛋白提取和酶解第73-74页
     ·H9c2 心肌细胞培养第74页
     ·DARTS 实验第74页
     ·DIGE 实验和胶内蛋白酶解第74-75页
     ·nanoLC-LTQ-Orbitrap-MS 分析第75页
     ·蛋白组学信息分析第75-76页
   ·结果与讨论第76-95页
     ·心脏超声心动图和病理切片分析第76-78页
     ·Label-free 蛋白组学分析第78-81页
     ·差异蛋白筛选和功能分析第81-90页
     ·DARTS 技术应用于四逆汤心肌直接作用靶标筛选分析第90-93页
     ·靶标蛋白功能和网络分析第93-95页
   ·本章小结第95-97页
综述第97-102页
参考文献第102-116页
在读期间发表论文和获奖情况第116-118页
致谢第118-119页

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