| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词及中英文对照 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1 玫烟色棒束孢 | 第11-12页 |
| ·玫烟色棒束孢的生物学特性 | 第11页 |
| ·玫烟色棒束孢应用现状和前景 | 第11-12页 |
| 2 丝状真菌遗传转化的方法 | 第12-13页 |
| 3 RNAi 的研究进展 | 第13-17页 |
| ·RNAi 的历史研究进程 | 第13-14页 |
| ·RNAi 的分子机制 | 第14页 |
| ·RNAi 的特点 | 第14-15页 |
| ·siRNA 的制备方法 | 第15-16页 |
| ·外源 siRNA 导入方法 | 第16-17页 |
| ·RNAi 的应用前景 | 第17页 |
| 4 立题依据 | 第17-18页 |
| 5 本论文研究的背景和意义 | 第18-19页 |
| 6 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 重组质粒 P-Z-F 的构建 | 第20-30页 |
| 1 实验材料和主要器材 | 第20-21页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第20-21页 |
| 2 技术路线和方法 | 第21-27页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·总 RNA 提取 | 第22页 |
| ·c DNA 第一链的合成 | 第22-23页 |
| ·正反向片段的扩增 | 第23-24页 |
| ·正反向目的片段琼脂糖凝胶回收纯化 | 第24页 |
| ·DH-5α大肠杆菌感受态转化 | 第24-25页 |
| ·pSilent-1 质粒小量提取 | 第25页 |
| ·P-Z 重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·P-Z-F 重组质粒的构建 | 第26页 |
| ·P-Z-F 酶切验证 | 第26-27页 |
| 3 结果及分析 | 第27-30页 |
| ·总 RNA 的提取和正反向目的片段的扩增 | 第27-29页 |
| ·P-Z-F 质粒的构建 | 第29页 |
| ·P-Z-F 质粒的双酶切验证 | 第29-30页 |
| 第三章 IfB01菌株原生质体制备条件研究和重组菌株筛选及dsRNA的合成 | 第30-43页 |
| 1 实验材料 | 第30-31页 |
| ·供试菌株 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·培养基、酶液、以及缓冲液的配制 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-36页 |
| ·原生质体制备 | 第31-32页 |
| ·原生质体制备的条件的初探 | 第32-33页 |
| ·酶液配比 | 第32页 |
| ·酶解时间 | 第32页 |
| ·酶解温度 | 第32页 |
| ·酶液 pH 值 | 第32-33页 |
| ·渗透压稳定剂浓度 | 第33页 |
| ·转速 | 第33页 |
| ·原生质体的纯化 | 第33页 |
| ·原生质体转化及转化子筛选 | 第33页 |
| ·原生质体转化条件优化 | 第33-34页 |
| ·重组菌株的筛选 | 第34-35页 |
| ·重组菌株的初步筛选 | 第34-35页 |
| ·重组菌株的稳定遗传筛选 | 第35页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第35-36页 |
| ·模板片段的扩增和回收 | 第35页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第35-36页 |
| 3 结果及分析 | 第36-43页 |
| ·玫烟色棒束孢原生质体制备条件初探 | 第36-38页 |
| ·幼嫩菌丝体和制备的原生质体 | 第36页 |
| ·酶液配比对原生质体制备的影响 | 第36-37页 |
| ·酶解温度和酶解时间对原生质体制备的影响 | 第37页 |
| ·酶解液 pH 值对原生质体制备的影响 | 第37-38页 |
| ·稳渗液浓度对原生质体制备的影响 | 第38页 |
| ·酶解时振荡转速对原生质体制备的影响 | 第38页 |
| ·玫烟色棒束孢原生质体转化条件优化 | 第38-39页 |
| ·重组菌株的筛选 | 第39-41页 |
| ·重组菌株的初步筛选 | 第39-40页 |
| ·重组菌株的最终筛选 | 第40-41页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第41-43页 |
| 第四章 重组菌株的生物学特性及毒力测验 | 第43-47页 |
| 1 实验材料和主要仪器 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-44页 |
| ·重组菌株的生物学特性 | 第43页 |
| ·重组菌株对 2 龄 B 型烟粉虱的毒效测试 | 第43-44页 |
| ·分生孢子悬浮液的配制 | 第43-44页 |
| ·B 型烟粉虱饲养 | 第44页 |
| ·重组菌株对 2 龄 B 型烟粉虱的毒效测试 | 第44页 |
| ·dsRNA 对 2 龄 B 型烟粉虱的毒效测试 | 第44页 |
| ·各浓度 dsRNA 的配制 | 第44页 |
| ·dsRNA 对 2 龄 B 型烟粉虱的毒效测试 | 第44页 |
| 3 结果及分析 | 第44-47页 |
| ·重组菌株和野生菌株 IfB01 生物学特性对比 | 第44-45页 |
| ·重组菌株对 2 龄 B 型烟粉虱的毒效测试 | 第45-46页 |
| ·dsRNA 对 2 龄 B 型烟粉虱的毒效测试 | 第46-47页 |
| 第五章 结论和讨论 | 第47-49页 |
| 1 结论 | 第47页 |
| 2 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |