| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-34页 |
| 第一节 线粒体钙离子摄取简介及其意义 | 第14-20页 |
| ·线粒体钙离子转运简介 | 第14-15页 |
| ·内质网-线粒体结点 | 第15-17页 |
| ·线粒体钙离子摄取对细胞生命活动的意义 | 第17-20页 |
| 第二节 MCU复合物的阐明 | 第20-25页 |
| ·MICU1的发现 | 第21-22页 |
| ·MCU的发现 | 第22-24页 |
| ·MCUb、MICU2和EMRE的发现 | 第24页 |
| ·MCU复合物的鉴定 | 第24-25页 |
| 第三节 MICU1的功能 | 第25-33页 |
| ·“EF-hand"钙离子结合motif | 第25-27页 |
| ·MICU1与MCU的关系 | 第27页 |
| ·MICU1的功能研究 | 第27-33页 |
| 第四节 本研究的目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-61页 |
| 第一节 实验材料 | 第34-41页 |
| ·基因 | 第34页 |
| ·本文所用菌株 | 第34-35页 |
| ·本文所用质粒 | 第35-36页 |
| ·常用试剂和工具 | 第36-37页 |
| ·晶体筛选试剂盒与优化试剂 | 第37-38页 |
| ·实验仪器 | 第38-39页 |
| ·试剂与溶液 | 第39-41页 |
| 第二节 实验方法 | 第41-61页 |
| ·基因克隆 | 第41-47页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第47-51页 |
| ·蛋白质结晶 | 第51-54页 |
| ·蛋白质晶体的数据收集和结构解析 | 第54-55页 |
| ·等温滴定量热法(ITC) | 第55-56页 |
| ·超速离心沉降速率实验(SV) | 第56页 |
| ·多角度光散射(MALS) | 第56页 |
| ·细胞培养与转染 | 第56-57页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第57-58页 |
| ·Western Blot检测 | 第58-59页 |
| ·细胞线粒体内钙离子的测定 | 第59-61页 |
| 第三章 Ca~(2+)-free MICU1的结构生物学研究 | 第61-79页 |
| 第一节 MICU1的生物信息学分析 | 第61-64页 |
| ·MICU1的基本特征 | 第61-62页 |
| ·MICU1的二级结构预测 | 第62-63页 |
| ·不同种属之间MICU1的序列同源性比对 | 第63-64页 |
| ·MICU1截短的基本特征 | 第64页 |
| 第二节 MICU1的克隆与表达 | 第64-66页 |
| ·MICU1的克隆 | 第64-65页 |
| ·MICU1的小量表达测试 | 第65-66页 |
| 第三节 Ca~(2+)-frree MICU1-xtal的纯化、结晶以及晶体的优化 | 第66-72页 |
| ·Ca~(2+)-free MICU1-xtal的纯化 | 第66-68页 |
| ·Ca~(2+)-free MICU1-xtal蛋白的结晶 | 第68-72页 |
| 第四节 Ca~(2+)-free MICU1-xtal硒代衍生物的纯化与结晶 | 第72-74页 |
| ·Ca~(2+)-free MICU1-xtal硒代衍生物的纯化 | 第72页 |
| ·Ca~(2+)-free MICU1-xtal硒代衍生物的结晶 | 第72-74页 |
| 第五节 Ca~(2+)-free MICU1-xtal的三维结构及其分析 | 第74-79页 |
| ·Ca~(2+)-free MICU1-xtal的三维结构 | 第74-76页 |
| ·Ca~(2+)-free MICU1-xtal的六聚体的堆积方式分析 | 第76-79页 |
| 第四章 Ca~(2+)-bound MICU1的结构生物学研究 | 第79-86页 |
| 第一节 Ca~(2+)-bound MICU1-xtal-deltaC的纯化 | 第79-80页 |
| 第二节 Ca~(2+)-bound MICU1-xtal-deltaC的结晶 | 第80-82页 |
| 第三节 Ca~(2+)-bound MICU1-xtal-deltaC的数据收集与结构解析 | 第82-86页 |
| 第五章 MICU1结构基础上的生化与细胞功能研究 | 第86-120页 |
| 第一节 Ca~(2+)可以诱导MICU1的聚集态的变化 | 第86-90页 |
| ·Ca~(2+)-free MICU1为六聚体 | 第86-88页 |
| ·Ca~(2+)-bound MICU1为多种聚集态的混合物 | 第88-90页 |
| 第二节 MICU1的C-helix对于线粒体钙摄取具有重要意义 | 第90-99页 |
| ·C-helix介导MICU1的寡聚化 | 第90-94页 |
| ·C-helix介导MICU1与MCU的相互作用 | 第94-96页 |
| ·C-helix在线粒体钙离子摄取过程中扮演着重要角色 | 第96-99页 |
| 第三节 MICU1的二聚体对于线粒体钙摄取具有重要意义 | 第99-109页 |
| ·Ca~(2+)-free与Ca~(2+)-bound的MICU1的二聚体具有不同的堆积方式 | 第99-100页 |
| ·MICU1的二聚体相互作用界面的研究 | 第100-106页 |
| ·MICU1的二聚体堆积对于线粒体钙离子摄取具有重要意义 | 第106-109页 |
| 第四节 Ca~(2+)诱导的MICU1的构象变化及其EF-hands研究 | 第109-116页 |
| ·MICU1单体的结构及其结合钙离子前后的构象变化 | 第109-112页 |
| ·MICU1的EF-hands研究 | 第112-116页 |
| 第五节 MICU1其他方面的探索研究 | 第116-120页 |
| ·MICU1-xtal的EF-hands突变体的聚集态的研究 | 第116-117页 |
| ·Ca~(2+)-bound MICU1-xtal聚集状态的研究 | 第117-118页 |
| ·MICU1与MCU的相互作用的研究 | 第118-120页 |
| 第六章 总结与展望 | 第120-124页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第129页 |
