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烟草DAD1基因功能初探

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
目录第8-12页
缩略词第12-13页
第一章 DAD蛋白研究进展第13-19页
 1 DAD基因的发现第13页
 2 DAD聚类分析、蛋白结构及亚细胞定位第13-14页
 3 DAD基因表达特性第14-15页
 4 DAD蛋白的生物学功能第15-17页
 5 本课题研究目的及意义第17-19页
第二章 本氏烟NbDAD1基因分离与表达第19-26页
 1 前言第19页
 2 材料与方法第19-21页
   ·植物材料第19页
   ·试剂与材料第19-20页
   ·RNA提取第20页
   ·cDNA一链及二链的合成第20页
   ·本氏烟DAD1基因的分离第20页
   ·NbDAD1基因的表达分析第20-21页
 3 结果与分析第21-24页
   ·本氏烟NbDAD1基因的分离第21页
   ·本氏烟NbDAD1基因生物信息学分析第21-23页
     ·NbDAD1跨膜区域预测第21-22页
     ·本氏烟NbDAD1基因同源性分析第22-23页
     ·本氏烟NbDAD1蛋白疏水性分析第23页
   ·本氏烟NbDAD1基因的表达模式第23-24页
     ·本氏烟NbDAD1基因在不同叶发育阶段表达分析第23-24页
     ·本氏烟NbDAD1基因在组织器官中的表达模式第24页
 4 讨论第24-26页
第三章 VIGS研究NbDAD1基因功能第26-37页
 1 前言第26页
 2 材料与方法第26-29页
   ·植物材料第27页
   ·载体和菌株第27页
   ·试剂第27页
   ·VIGS沉默NbDAD1基因第27-28页
     ·NbDAD1-PYL156载体构建第27页
     ·基因沉默操作第27页
     ·沉默植株色素含量测定第27页
     ·沉默植株过氧化物酶POD酶活测定第27-28页
     ·NbDAD1在沉默植株中的表达第28页
   ·植物生长激素合成关键酶相关基因的表达第28-29页
     ·qRT-PCR引物设计第28-29页
     ·目的基因qRT-PCR分析第29页
 3 结果与分析第29-35页
   ·NbDAD1-PYL156载体构建第29-30页
   ·NbDAD1基因沉默植株的获得第30-32页
   ·NbDAD1基因沉默植株部分生理生化指标分析第32-33页
     ·NbDAD1基因沉默植株的根长、茎长及腋芽数的测定第32页
     ·沉默植株的色素含量及POD酶活的测定第32-33页
     ·NbDAD1基因的表达第33页
   ·植株激素合成相关基因的表达第33-35页
 4 讨论第35-37页
第四章 烟草的遗传转化研究DAD1基因功能第37-48页
 1 前言第37页
 2 材料与方法第37-41页
   ·植物材料第37页
   ·载体和菌株第37页
   ·试剂第37-38页
   ·烟草NtDAD1基因超表达载体及携带HAtag标签载体的构建第38-39页
     ·引物设计第38页
     ·烟草NtDAD1基因的分离第38页
     ·超表达载体的构建第38-39页
   ·烟草DAD1基因RNAi载体构建第39-40页
     ·引物设计第39页
     ·RNAi载体构建第39-40页
   ·农杆菌介导遗传转化烟草第40页
   ·抗性植株的PCR检测第40页
   ·石蜡切片观察第40-41页
     ·取材及固定第40页
     ·固定液洗脱第40页
     ·脱水及透明处理第40-41页
     ·浸蜡第41页
     ·包埋第41页
     ·切片第41页
     ·粘片、展片第41页
     ·脱蜡及染色第41页
     ·镜检拍照第41页
 3 结果与分析第41-46页
   ·超表达载体的构建第41-42页
   ·烟草DAD1基因RNAI载体的构建第42-43页
   ·转基因抗性烟草的获得第43-44页
   ·抗性烟草的潮霉素检测第44-45页
   ·石蜡切片组织观察第45-46页
 4 讨论第46-48页
第五章 NbDAD1基因启动子克隆第48-57页
 1 前言第48页
 2 材料与方法第48-51页
   ·植物材料第48页
   ·试剂第48页
   ·本氏烟基因组DNA提取第48-49页
   ·NbDAD1基因启动子克隆第49-51页
     ·引物设计第49页
     ·第一次TAIL-PCR反应第49-51页
     ·目的条带验证、回收、测序第51页
     ·第二次TAIL-PCR反应第51页
   ·NbDAD1基因启动子片段的扩增第51页
     ·引物设计第51页
     ·克隆启动子第51页
   ·NbDAD1基因启动子序列分析第51页
 3 结果与分析第51-55页
   ·本氏烟叶片基因组DNA提取第51-52页
   ·第一次TAIL-PCR结果第52-53页
   ·第二次TAIL-PCR结果第53-54页
   ·NbDAD1基因启动子片段的扩增第54-55页
   ·NbDAD1基因启动子序列功能元件分析第55页
 4 讨论第55-57页
第六章 结论与展望第57-59页
 1、研究结论第57-58页
 2、研究展望第58-59页
参考文献第59-65页
致谢第65-66页
攻读学位期间取得的研究成果第66-67页

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