| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-26页 |
| ·生产医药蛋白的生物反应器 | 第9-14页 |
| ·医药蛋白生物反应器的种类 | 第9-14页 |
| ·分泌性表达 | 第14-17页 |
| ·分泌途径 | 第14-17页 |
| ·分泌途径的基因调控 | 第17-20页 |
| ·UPR信号通路 | 第18-20页 |
| ·宿主遗传操作 | 第20-23页 |
| ·单基因修饰 | 第20-21页 |
| ·多基因修饰 | 第21-22页 |
| ·途径修饰 | 第22-23页 |
| ·宿主筛选 | 第23-24页 |
| ·酿酒酵母细胞表面展示技术 | 第23-24页 |
| ·基于细胞表面展示技术的筛选体系 | 第24页 |
| ·本论文研究背景、目的和意义 | 第24-26页 |
| ·研究背景 | 第24-25页 |
| ·主要研究内容及目的 | 第25-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-45页 |
| ·实验材料 | 第26-32页 |
| ·质粒、菌株和引物 | 第26-29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·主要溶液 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第32-34页 |
| ·小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB法） | 第34页 |
| ·DNA的限制酶消化 | 第34-35页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| ·从琼脂糖中回收DNA | 第35-36页 |
| ·DNA的连接反应 | 第36页 |
| ·PCR扩增反应 | 第36-38页 |
| ·酵母细胞的转化方法 | 第38页 |
| ·酵母中质粒的回收 | 第38-39页 |
| ·不同交配型酵母细胞之间的杂交 | 第39页 |
| ·酵母交配型的验证 | 第39页 |
| ·一步基因置换法缺失目的基因 | 第39-40页 |
| ·融合PCR | 第40-41页 |
| ·菌体生长量的检测 | 第41页 |
| ·还原糖测定 | 第41-42页 |
| ·Agar diffusion实验改进测定HEL活性方法 | 第42页 |
| ·溶菌酶的提取 | 第42-43页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第43页 |
| ·HEL HPLC分析 | 第43页 |
| ·菌体细胞亲合层析洗脱 | 第43-44页 |
| ·质粒稳定性实验 | 第44-45页 |
| 第三章 溶菌酶基因在酿酒酵母中表达 | 第45-54页 |
| ·结果与分析 | 第45-53页 |
| ·HELcDNA的克隆与表达 | 第45-48页 |
| ·宿主表达策略 | 第48-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 持续激活UPR信号调节异源表达 | 第54-64页 |
| ·结果与分析 | 第55-63页 |
| ·HAC1icDNA的克隆 | 第55-56页 |
| ·HAC1icDNA激活UPR信号 | 第56-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 Hac1p 定向进化 | 第64-84页 |
| ·结果与分析 | 第64-82页 |
| ·HAC1~icDNAm功能验证 | 第64-65页 |
| ·HAC1~icDNAm调节异源表达 | 第65-66页 |
| ·HAC1~icDNA的定向进化 | 第66-77页 |
| ·Hac1p_(m1) 调节特性 | 第77-79页 |
| ·UPR信号通路中Hac1p调节基因分析 | 第79-82页 |
| ·本章小结 | 第82-84页 |
| 第六章 UPR信号调节基因的修饰 | 第84-92页 |
| ·结果与分析 | 第84-91页 |
| ·MAE1 修饰对异源表达的影响 | 第85-89页 |
| ·GPD2 基因缺失对异源表达的影响 | 第89-91页 |
| ·本章小结 | 第91-92页 |
| 第七章 总结与展望 | 第92-94页 |
| ·主要创造性工作总结 | 第92页 |
| ·相关工作的前景展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-105页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文和参加科研情况 | 第105-106页 |
| 附录名词缩写 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |