| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 研究背景与立题依据 | 第15-22页 |
| ·研究背景 | 第15-20页 |
| ·海冰环境 | 第15页 |
| ·海冰 | 第15页 |
| ·海冰胞外多糖 | 第15-16页 |
| ·海冰藻类 | 第16-18页 |
| ·海冰藻类概述 | 第16页 |
| ·海冰硅藻结构、组成 | 第16-17页 |
| ·海冰硅藻细胞壁的功能 | 第17-18页 |
| ·海冰细菌 | 第18页 |
| ·海冰细菌的生理生态学 | 第18页 |
| ·海冰细菌的生态作用 | 第18页 |
| ·海冰细菌在氮循环和碳循环中的生态作用 | 第18-19页 |
| ·纤维素酶概述 | 第19-20页 |
| ·纤维素酶来源 | 第19页 |
| ·纤维素酶分类 | 第19页 |
| ·纤维素酶催化功能的研究进展 | 第19-20页 |
| ·低温耐盐纤维素酶 | 第20页 |
| ·立题依据与研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 北极海冰适冷菌Pseudoalteromonas sp.SM495胞外酶对北极海冰硅藻Fragilaria sp.strain 04的作用 | 第22-34页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第22-24页 |
| ·藻株与培养基 | 第23页 |
| ·菌株与培养基 | 第23页 |
| ·主要药品、试剂和试剂盒 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-25页 |
| ·北极海冰硅藻F.sp.strain 04的培养 | 第24页 |
| ·北极海冰适冷菌Ps.sp.SM495的培养 | 第24页 |
| ·北极海冰适冷菌Ps.sp.SM495菌体以及胞外酶对北极海冰硅藻F.sp.strain 04的作用和取样 | 第24-25页 |
| ·光学显微镜观察硅藻细胞结构 | 第25页 |
| ·硅藻光谱吸收的测定 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-32页 |
| ·北极海冰硅藻F.sp.strain 04的培养 | 第25-26页 |
| ·Ps.sp.SM495的培养 | 第26页 |
| ·Ps.sp.SM495对硅藻的作用 | 第26-28页 |
| ·Ps.sp.SM495胞外酶对硅藻作用 | 第28-32页 |
| ·Ps.sp.SM495胞外酶处理前后硅藻溶液的变化 | 第28-29页 |
| ·显微镜观察Ps.sp.SM495胞外酶处理前后硅藻的细胞结构变化 | 第29-30页 |
| ·Ps.sp.SM495胞外酶处理前后硅藻溶液的光谱吸收 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 北极海冰硅藻Fragilaria sp.strain 04及其代谢物对北极海冰适冷菌Pseudoalteromonas sp.SM495与碳循环有关的胞外酶基因的诱导作用 | 第34-53页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第34-36页 |
| ·藻株与培养基 | 第34页 |
| ·菌株与培养基 | 第34-35页 |
| ·主要药品、试剂和试剂盒 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·数据库及分析软件 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·北极海冰硅藻F.sp.strain 04的培养、冻融 | 第36页 |
| ·诱导培养基组成的条件摸索 | 第36页 |
| ·Ps.sp.SM495的培养、取样、生长曲线测定 | 第36-37页 |
| ·Ps.sp.SM495总RNA的提取和反转录 | 第37-38页 |
| ·Ps.sp.SM495中可能和硅藻有关的胞外酶基因的选取和引物设计 | 第38页 |
| ·RT qPCR | 第38页 |
| ·纤维素酶、果胶酶类、褐藻酸裂解酶的酶活检测 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-51页 |
| ·北极海冰硅藻F.sp.strain 04的培养、冻融 | 第39-40页 |
| ·加硅藻培养基组成 | 第40-41页 |
| ·Ps.sp.SM495的生长曲线 | 第41-42页 |
| ·Ps.sp.SM495的总RNA | 第42-43页 |
| ·Ps.sp.SM495可能和硅藻有关的胞外酶基因 | 第43-45页 |
| ·Ps.sp.SM495胞外酶基因在硅藻诱导下的表达量变化 | 第45-48页 |
| ·Ps.sp.SM495胞外纤维素酶、果胶酶类、褐藻酸裂解酶在硅藻诱导前后的酶活检测 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 北极海冰适冷菌Pseudoalteromonas sp.SM495纤维素酶Cel495的分离纯化、异源表达和性质研究 | 第53-76页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第53-55页 |
| ·菌株与质粒 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·主要药品、试剂和试剂盒 | 第54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54-55页 |
| ·数据库及分析软件 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-61页 |
| ·菌株的培养 | 第55页 |
| ·纤维素酶酶活测定方法 | 第55-56页 |
| ·蛋白质含量测定方法 | 第56页 |
| ·蛋白质电泳方法 | 第56-57页 |
| ·Ps.sp.SM495野生菌中纤维素酶的纯化 | 第57-58页 |
| ·Ps.sp.SM495野生菌中纤维素酶的N端蛋白序列的测定和比对 | 第58页 |
| ·Cel495的结构域及氨基酸序列分析 | 第58页 |
| ·Cel495重组酶的异源表达和分离纯化 | 第58-60页 |
| ·Cel495重组酶的基因克隆 | 第58-59页 |
| ·Cel495重组酶在E.coli BL21(DE3)中的异源表达 | 第59页 |
| ·Cel495全酶和催化结构域的分离纯化和电泳检测、酶含量测定 | 第59页 |
| ·表达菌株和质粒的保存 | 第59-60页 |
| ·Cel495野生酶和重组酶的酶学性质分析 | 第60-61页 |
| ·底物特异性分析 | 第60页 |
| ·最适反应温度及温度稳定性分析 | 第60页 |
| ·最适反应pH分析 | 第60页 |
| ·金属离子和化学试剂对酶活性的影响 | 第60-61页 |
| ·NaCl对酶活性的影响 | 第61页 |
| ·K_m值的测定及k_(cat)值、k_(cat)/K_m值的求算 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-74页 |
| ·Ps.sp.SM495的发酵条件 | 第61页 |
| ·Ps.sp.SM495胞外纤维素酶的纯化及N端测序、蛋白序列确定 | 第61-63页 |
| ·Ps.sp.SM495胞外纤维素酶的分离纯化 | 第61-63页 |
| ·N端序列的确定 | 第63页 |
| ·蛋白基因序列的确定 | 第63页 |
| ·Cel495的结构域及氨基酸序列分析 | 第63-64页 |
| ·Cel495重组酶的异源表达和分离纯化 | 第64-66页 |
| ·Cel495重组酶的基因克隆 | 第64-65页 |
| ·Cel495重组酶的表达和纯化 | 第65-66页 |
| ·Cel495野生酶和重组酶的酶学性质分析 | 第66-74页 |
| ·Cel495的最适反应温度及温度稳定性分析 | 第66-68页 |
| ·Cel495的最适反应pH分析 | 第68-69页 |
| ·Cel495的底物特异性分析 | 第69页 |
| ·Cel495的金属离子对酶活性的影响 | 第69-71页 |
| ·NaCl对Cel495酶活性的影响 | 第71-72页 |
| ·Cel495的底物亲和力和催化效率比较 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 全文总结与展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 在读期间发表的论文、专利及获奖情况 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第88页 |
