| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 图表目录 | 第15-18页 |
| 英文缩略表 | 第18-20页 |
| 第一章 引言 | 第20-34页 |
| ·新城疫病毒概述 | 第20-21页 |
| ·真核翻译起始研究进展 | 第21-25页 |
| ·真核翻译起始概述 | 第21-22页 |
| ·真核生物帽子结构的分类 | 第22页 |
| ·翻译起始复合体 eIF4F | 第22-23页 |
| ·翻译起始复合体 eIF4F 功能的调控机制 | 第23-25页 |
| ·PI3K/Akt/mTOR 通路对 eIF4F 功能的调控 | 第23-24页 |
| ·促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）信号通路对 eIF4E 磷酸化水平的调节 | 第24-25页 |
| ·病毒“劫持”真核翻译系统的研究进展 | 第25-33页 |
| ·抑制宿主 mRNA 的翻译 | 第25-28页 |
| ·病毒对真核翻译起始因子的直接调节作用 | 第26-27页 |
| ·病毒对真核翻译起始因子的间接调节作用 | 第27-28页 |
| ·病毒通过对 RNA 的调节来控制蛋白质翻译 | 第28页 |
| ·帽子结构非依赖性（cap-independent）翻译机制 | 第28-29页 |
| ·在 mRNA 的 5’端偶联病毒蛋白 | 第28页 |
| ·IRES-依赖性的翻译机制 | 第28-29页 |
| ·病毒对宿主帽子结构依赖性（cap-dependent）蛋白翻译的调节作用 | 第29-31页 |
| ·DNA 病毒对帽子结构依赖性（cap-dependent）蛋白翻译的调控 | 第29-30页 |
| ·RNA 病毒对帽子结构依赖性（cap-dependent）蛋白翻译的调控 | 第30-31页 |
| ·eIF2α在调控蛋白翻译和抗病毒免疫方面的作用 | 第31-32页 |
| ·病毒对 eIF2α磷酸化的抑制作用 | 第32页 |
| ·病毒采用不依赖于 eIF2 的翻译机制逃避 eIF2α磷酸化所产生的抑制作用 | 第32页 |
| ·病毒调控宿主翻译系统研究展望 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第33-34页 |
| 第二章 新城疫病毒 NP 蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 | 第34-43页 |
| 摘要 | 第34-35页 |
| ·材料和方法 | 第35-38页 |
| ·病毒 | 第35页 |
| ·细胞和实验动物使用 | 第35-36页 |
| ·原核表达载体和主要试剂 | 第36页 |
| ·主要缓冲液及试剂的配制 | 第36页 |
| ·DUCK/JS/10 弱毒株 NP 蛋白的克隆与原核表达 | 第36页 |
| ·重组 NP 蛋白的原核表达及纯化 | 第36-37页 |
| ·动物免疫及间接 ELISA 检测方法的建立 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第37页 |
| ·单克隆抗体效价的检测 | 第37-38页 |
| ·间接 ELISA 检测 | 第37页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第37页 |
| ·Western Blot 检测 | 第37-38页 |
| ·NP 单克隆抗体与不同毒株反应性检测 | 第38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·NP 基因扩增及重组表达载体的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·pET-32a-NP 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第39-40页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的建立及腹水抗体效价测定 | 第40页 |
| ·NP 单克隆抗体的间接免疫荧光（IFA）检测 | 第40页 |
| ·NP 单克隆抗体的 Western Blot 检测 | 第40-41页 |
| ·NP 单克隆抗体与不同 NDV 毒株反应性检测 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 新城疫病毒依赖宿主真核翻译系统进行病毒蛋白合成 | 第43-54页 |
| 摘要 | 第43-44页 |
| ·材料和方法 | 第44-48页 |
| ·病毒和细胞系 | 第44页 |
| ·抗体及主要试剂 | 第44页 |
| ·主要缓冲液及试剂配制 | 第44-45页 |
| ·Western-blot 检测 NDV 感染后 eIF4F 各组分的磷酸化水平变化 | 第45-46页 |
| ·紫外灭活新城疫病毒诱导 eIF4F 磷酸化检测 | 第46页 |
| ·m7GTP pull down 检测 NDV 感染后 eIF4F 复合体的装配活性变化 | 第46页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）观察 NP 蛋白与 eIF4E 共定位 | 第46-47页 |
| ·eIF4E 和/或 eIF4G 的干扰对 NDV 复制的影响 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-53页 |
| ·新城疫病毒感染后诱导 eIF4E 和 eIF4G 的磷酸化 | 第48页 |
| ·紫外灭活的新城疫病毒不诱导 eIF4E 和 eIF4G 的磷酸化 | 第48-50页 |
| ·新城疫病毒感染能够诱导 eIF4F 复合体的装配 | 第50页 |
| ·新城疫病毒感染能够诱导 eIF4E 发生亚细胞定位变化 | 第50-51页 |
| ·eIF4E 和/或 eIF4G 的缺失能够影响新城疫病毒蛋白的合成 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 PI3K/AKT 通路在 NDV 激活 EIF4F 过程中的调控作用 | 第54-70页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| ·材料和方法 | 第55-58页 |
| ·病毒和细胞系 | 第55页 |
| ·抗体及主要试剂 | 第55页 |
| ·主要缓冲液及试剂配制 | 第55页 |
| ·NDV 感染后 PI3K/Akt 通路及下游信号分子的磷酸化检测 | 第55-56页 |
| ·超氧化物歧化酶（WST-1）法筛选最适抑制剂工作浓度 | 第56-57页 |
| ·抑制剂阻断 PI3K/Akt/mTOR 通路后下游信号分子磷酸化水平检测 | 第57页 |
| ·抑制剂阻断 PI3K/Akt/mTOR 通路后对 eIF4F 复合体装配的影响 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-68页 |
| ·新城疫感染诱导 PI3K/Akt 通路及下游信号分子的活化 | 第58-59页 |
| ·新城疫感染可诱导 4E-BP1 发生过磷酸化 | 第59-60页 |
| ·最适抑制剂工作浓度的确定 | 第60-61页 |
| ·PI3K 参与介导 NDV 感染所诱导的 Akt 及下游信号分子的磷酸化 | 第61-63页 |
| ·mTOR 激酶介导 NDV 感染所引起的 eIF4G 磷酸化 | 第63-64页 |
| ·NDV 诱导的 4E-BP1 过磷酸化能够拮抗 Rapamycin 的抑制作用 | 第64页 |
| ·NDV 感染后通过激活 PI3K/Akt 通路诱导 eIF4F 复合体的形成 | 第64-66页 |
| ·LY294002 对新城疫病毒复制的影响 | 第66-67页 |
| ·Rapamycin 不抑制 NDV 感染所诱导的 eIF4F 复合体的形成 | 第67页 |
| ·Rapamycin 对新城疫病毒复制的影响 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 MAPK 信号通路在 NDV 激活 EIF4F 过程中的调控作用 | 第70-88页 |
| 摘要 | 第70-71页 |
| ·材料和方法 | 第71-74页 |
| ·病毒和细胞系 | 第71页 |
| ·抗体及主要试剂 | 第71页 |
| ·主要缓冲液及试剂配制 | 第71-72页 |
| ·NDV 感染后 p38、Erk1/2 及下游 Mnk1 激酶的磷酸化检测 | 第72-73页 |
| ·超氧化物歧化酶（WST-1）法筛选最适抑制剂工作浓度 | 第73页 |
| ·抑制剂阻断 p38、Erk1/2 及下游 Mnk1 后下游信号分子磷酸化检测 | 第73页 |
| ·抑制剂阻断 p38MAPK/Mnk1 通路后对 eIF4F 复合体装配的影响 | 第73-74页 |
| ·结果 | 第74-86页 |
| ·新城疫感染诱导 p38、Erk1/2 及下游 Mnk1 的活化 | 第74-76页 |
| ·最适抑制剂工作浓度的确定 | 第76页 |
| ·NDV 感染通过激活 Mnk1 诱导 eIF4E 发生磷酸化 | 第76-78页 |
| ·Erk1/2 不介导新城疫病毒感染所引起的 eIF4E 的磷酸化 | 第78-79页 |
| ·p38MAPK 介导 NDV 感染诱导的 Mnk1 以及下游 eIF4E 的磷酸化 | 第79-81页 |
| ·NDV 感染不通过激活 Mnk1 激酶诱导 4E-BP1 的过磷酸化 | 第81页 |
| ·NDV 感染不通过激活 MAPK 信号通路诱导 4E-BP1 的过磷酸化 | 第81-83页 |
| ·MAPK 通路不介导 NDV 诱导的 eIF4F 复合体形成 | 第83页 |
| ·MAPK 通路对新城疫病毒复制的影响 | 第83-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 新城疫病毒 NP 蛋白与 EIF4F 复合体相互作用 | 第88-102页 |
| 摘要 | 第88-89页 |
| ·材料和方法 | 第89-92页 |
| ·病毒和细胞系 | 第89页 |
| ·抗体和质粒 | 第89页 |
| ·主要试剂 | 第89页 |
| ·主要缓冲液及试剂配制 | 第89页 |
| ·NP 相关真核表达质粒的构建 | 第89-91页 |
| ·FLAG-NP 及各突变体的表达及 Western-Blot 检测 | 第91页 |
| ·m7GTP pull down 检测病毒蛋白与 eIF4F 复合体的互作 | 第91-92页 |
| ·新城疫 NP 蛋白与 eIF4F 复合体的免疫共沉淀（Co-IP） | 第92页 |
| ·结果 | 第92-100页 |
| ·m7GTP pull down 显示 NP 蛋白可能与 eIF4F 复合体存在相互作用 | 第92-93页 |
| ·NDV 感染后 NP 蛋白与 eIF4F 复合体的免疫共沉淀 | 第93-94页 |
| ·NP 蛋白与 eIF4F 复合体的相互作用不需要其他病毒蛋白辅助 | 第94-96页 |
| ·FLAG-NP mutant 真核表达质粒的构建 | 第96-97页 |
| ·FLAG-NP 各突变体的真核表达及 Western-Blot 检测 | 第97-98页 |
| ·新城疫病毒 NP 蛋白与 eIF4F 复合体互作结构域分析 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| 第七章 全文结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 作者简历 | 第112页 |
