| 中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-35页 |
| ·PPRV研究进展 | 第13-18页 |
| ·形态学与基因组结构 | 第13-16页 |
| ·病毒的复制与毒力 | 第16-17页 |
| ·病毒的进化与分型 | 第17-18页 |
| ·PPR研究进展 | 第18-25页 |
| ·临床症状与病理学研究 | 第18-20页 |
| ·流行与分布 | 第20-22页 |
| ·防控与消灭计划 | 第22-25页 |
| ·MV受体研究进展 | 第25-31页 |
| ·MV受体的发现 | 第25-26页 |
| ·MV-H与各受体作用模式 | 第26-31页 |
| ·MV-H与受体相互作用在病毒复制中的作用 | 第31页 |
| ·分子模拟技术研究进展 | 第31-35页 |
| ·分子模拟技术的发展 | 第31-32页 |
| ·分子模拟技术在本研究中运用的基础平台 | 第32-33页 |
| ·分子模拟的局限与展望 | 第33-35页 |
| 第二章 绵羊Nectin4 基因的克隆与表达 | 第35-51页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·动物与组织 | 第36页 |
| ·参考序列及引物设计软件 | 第36页 |
| ·载体、菌株和细胞 | 第36页 |
| ·主要试剂及酶 | 第36页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第36-38页 |
| ·方法 | 第38-46页 |
| ·绵羊肺支气管总RNA的提取 | 第38页 |
| ·绵羊Nectin4 基因的巢式RT-PCR扩增 | 第38-42页 |
| ·PCR产物的T载体克隆 | 第42-43页 |
| ·绵羊Nectin4 基因真核表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·Nectin4 蛋白的真核表达 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-49页 |
| ·绵羊Nectin4 基因第一轮PCR的扩增 | 第46-47页 |
| ·绵羊Nectin4 基因第二轮PCR的扩增 | 第47页 |
| ·阳性克隆中Nectin4 基因的扩增 | 第47-48页 |
| ·重组表达质粒pCMV-Myc-Nectin4 的构建与鉴定 | 第48页 |
| ·Nectin4 基因表达的免疫荧光检测 | 第48-49页 |
| ·Nectin4 蛋白的Western blotting鉴定 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第三章 PPRV H-野毒和PPRV H-疫苗的克隆与表达 | 第51-59页 |
| 摘要 | 第51页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·载体、菌株和细胞 | 第51页 |
| ·主要试剂及酶 | 第51-52页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·PPRV Hw与PPRV Hv全长的PCR扩增 | 第52页 |
| ·Hw和Hv基因真核表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·Hw和Hv蛋白的真核表达与检测 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·PPRV Hw重组质粒的构建与蛋白表达 | 第54-56页 |
| ·PPRV Hv重组质粒的构建与蛋白表达 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 同源建模法预测PPRV Hw／PPRV Hv与羊源Nectin4／SLAM的相互作用 | 第59-93页 |
| 摘要 | 第59页 |
| ·材料 | 第59-61页 |
| ·服务器 | 第59页 |
| ·软件 | 第59-60页 |
| ·序列 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-62页 |
| ·复合物同源建模 | 第61页 |
| ·相互作用能计算 | 第61-62页 |
| ·虚拟氨基酸突变 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-91页 |
| ·PPRV Hw-羊源SLAM复合物结构的解析 | 第62-64页 |
| ·PPRV Hv-羊源SLAM复合物结构的解析 | 第64-67页 |
| ·羊源SLAM分别与PPRV Hw、PPRV Hv相互作用能的比较 | 第67-70页 |
| ·羊源SLAM分别与PPRV Hw、PPRV Hv相互作用关键AA的预测 | 第70-74页 |
| ·PPRV Hw-羊源Nectin4 复合物结构的解析 | 第74-76页 |
| ·PPRV Hv-羊源Nectin4 复合物结构的解析 | 第76-79页 |
| ·羊源Nectin4 分别与PPRV Hw、PPRV Hv相互作用能的比较 | 第79-82页 |
| ·羊源Nectin4 分别与PPRV Hw、PPRV Hv相互作用关键AA的预测 | 第82-86页 |
| ·PPRV Hw分别与羊源SLAM、羊源Nectin4 相互作用的差异 | 第86-88页 |
| ·PPRV Hv分别与羊源SLAM、羊源Nectin4 相互作用的差异 | 第88-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| 第五章 PPRV H与羊源Nectin4 的相互作用 | 第93-108页 |
| 摘要 | 第93页 |
| ·材料与方法 | 第93-100页 |
| ·动物与组织 | 第93-94页 |
| ·病毒、细胞、菌株和载体 | 第94页 |
| ·主要试剂及酶 | 第94页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第94页 |
| ·PPRV Hw和PPRV Hv胞外区真核表达质粒的构建 | 第94-95页 |
| ·羊源Nectin4 胞外区真核表达质粒的构建 | 第95-97页 |
| ·质粒共转染 | 第97页 |
| ·间接免疫荧光 | 第97页 |
| ·Western Blotting检测 | 第97页 |
| ·激光共聚焦观察定位 | 第97页 |
| ·Co-Ip实验 | 第97-98页 |
| ·病毒感染实验 | 第98-99页 |
| ·荧光定量PCR检测Nectin4 在绵羊各组织中的分布 | 第99-100页 |
| ·结果 | 第100-106页 |
| ·pCDNA3-Flag-bwHw、pCDNA3-Flag-bwHv和pCMV-Myc-bwNectin4c重组质粒的构建与鉴定 | 第100-101页 |
| ·bwHw、bwHv和bwNectin4 蛋白的表达 | 第101-102页 |
| ·bwHw与bwNectin4、bwHv与bwNectin4 在CHO细胞共定位 | 第102-103页 |
| ·PPRV野毒株和疫苗株H蛋白均可与羊源Nectin4 蛋白相互作用 | 第103页 |
| ·Nectin4 可提高PPRV在Vero细胞中的繁殖 | 第103-104页 |
| ·PPRV的组织嗜性与Nectin4 在绵羊的组织分布具有相关性 | 第104-106页 |
| ·讨论 | 第106-108页 |
| 第六章 PPRV Hw与绵羊Nectin4 相互作用关键区域和关键氨基酸的鉴定 | 第108-115页 |
| 摘要 | 第108页 |
| ·材料和方法 | 第108-112页 |
| ·细胞、菌株和载体 | 第108页 |
| ·主要试剂及酶 | 第108-109页 |
| ·相互作用区域重组质粒（pCMV-Myc-zjNectin4）的构建 | 第109-110页 |
| ·点突变质粒的构建与鉴定 | 第110-111页 |
| ·pCMV-Myc-zjNectin4 与pCDNA3-Flag-bwHw质粒的共表达 | 第111-112页 |
| ·点突变质粒与pCMV-Myc-bwNectin4 质粒的共表达 | 第112页 |
| ·激光共聚焦观察共定位 | 第112页 |
| ·Co-Ip实验 | 第112页 |
| ·结果 | 第112-114页 |
| ·zjNectin4 能与PPRV Hw相互作用 | 第112-113页 |
| ·五个PPRV bwHw点突变体均能与bwNectin4 相互作用 | 第113-114页 |
| ·讨论 | 第114-115页 |
| 第七章 H蛋白对PPRV宿主嗜性影响的分析 | 第115-134页 |
| 摘要 | 第115页 |
| ·材料和方法 | 第115-117页 |
| ·服务器 | 第115页 |
| ·软件 | 第115-116页 |
| ·序列 | 第116页 |
| ·复合物同源建模 | 第116页 |
| ·相互作用能计算 | 第116-117页 |
| ·虚拟氨基酸突变 | 第117页 |
| ·结果 | 第117-132页 |
| ·PPRV Hw/Hv分别与人源SLAM复合物的构建 | 第117-118页 |
| ·PPRV Hw/Hv分别与人源SLAM相互作用能力的分析 | 第118-119页 |
| ·预测增强人源SLAM与PPRV Hw/Hv相互作用能力的突变 | 第119-132页 |
| ·讨论 | 第132-134页 |
| 第八章 全文结论 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 作者简介 | 第145页 |
