| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语中英文对照 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-38页 |
| 第一章 体细胞重编程的方法及作用机制 | 第16-22页 |
| 1 引言 | 第16页 |
| 2 体细胞通过核移植进行重编程 | 第16-18页 |
| 3 体细胞与干细胞融合进行重编程 | 第18页 |
| 4 细胞通过体外培养自发重编程 | 第18-19页 |
| 5 转染特异性转录因子进行重编程 | 第19-22页 |
| 第二章 诱导性多能干细胞研究进展 | 第22-34页 |
| 1 引言 | 第22-23页 |
| 2 iPSCs的重编程方法 | 第23页 |
| 3 不同来源的供体细胞对重编程效果的影响 | 第23-24页 |
| 4 重编程的机制 | 第24-25页 |
| 5 iPSCs的筛选方式 | 第25-26页 |
| 6 外源多能因子的作用 | 第26-29页 |
| ·OCT4的作用 | 第26页 |
| ·SOX2的作用 | 第26-27页 |
| ·cMYC的作用 | 第27-28页 |
| ·KLF4的作用 | 第28页 |
| ·NANOG的作用 | 第28-29页 |
| ·LIN28的作用 | 第29页 |
| 7 iPSCs的应用价值 | 第29-30页 |
| ·消除阻碍干细胞研究的伦理问题 | 第29页 |
| ·克服ESCs应用中存在的免疫排斥反应 | 第29-30页 |
| ·已经取得的研究成果 | 第30页 |
| 8 iPSCs存在的问题 | 第30-34页 |
| ·具有一定的致癌性 | 第30-31页 |
| ·重编程的效率低 | 第31页 |
| ·以病毒为载体的安全性问题 | 第31页 |
| ·来源于多能干细胞的组织在移植后存活率低 | 第31-34页 |
| 第三章 诱导性多能干细胞与畜牧业生产 | 第34-38页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 ESCs与畜牧业生产 | 第34页 |
| ·生产克隆动物 | 第34页 |
| ·生产转基因动物 | 第34页 |
| 3 偶蹄类家畜iPSCs研究进展 | 第34-38页 |
| ·猪iPSCs研究现状 | 第35页 |
| ·牛iPSCs研究现状 | 第35页 |
| ·羊iPSCs研究现状 | 第35-38页 |
| 第二部分 试验部分 | 第38-94页 |
| 第四章 山羊iPSCs诱导及培养体系的建立 | 第38-54页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-46页 |
| ·试验动物 | 第38页 |
| ·细胞株 | 第38页 |
| ·试剂耗材及溶液配制 | 第38-39页 |
| ·试验仪器 | 第39-40页 |
| ·试验方法 | 第40-46页 |
| 3 试验结果 | 第46-50页 |
| ·羊耳成纤维细胞的形态学观察 | 第46-47页 |
| ·细胞生长曲线分析 | 第47页 |
| ·细胞核型分析 | 第47页 |
| ·质粒质量检测 | 第47-48页 |
| ·病毒质量检测 | 第48-49页 |
| ·山羊iPSCs培养条件 | 第49页 |
| ·山羊iPSCs诱导和培养 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| ·体细胞的原代培养与生物学特性分析 | 第51页 |
| ·山羊iPSCs诱导体系的优化 | 第51页 |
| ·山羊iPSCs培养体系的优化 | 第51-52页 |
| ·克隆的挑取和扩增 | 第52-53页 |
| ·山羊iPSCs形态学特征 | 第53-54页 |
| 第五章 山羊iPSCs的鉴定 | 第54-66页 |
| 1 引言 | 第54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-59页 |
| ·细胞株 | 第54页 |
| ·试剂耗材及溶液配制 | 第54-55页 |
| ·试验仪器 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-59页 |
| 3 试验结果 | 第59-63页 |
| ·细胞核型 | 第59页 |
| ·碱性磷酸酶检测 | 第59-60页 |
| ·山羊iPSCs多能基因表达分析 | 第60-61页 |
| ·山羊iPSCs多能性相关蛋白表达分析 | 第61页 |
| ·山羊iPSCs在体外形成类胚体 | 第61-62页 |
| ·山羊iPSCs在体内形成畸胎瘤 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| ·山羊iPSCs形态学分析 | 第63页 |
| ·山羊iPSCs多能性相关基因表达的检测 | 第63-64页 |
| ·山羊iPSCs的在体内和体外的分化潜能鉴定 | 第64页 |
| ·山羊iPSCs核型的鉴定 | 第64-66页 |
| 第六章 克隆羊和转基因克隆羊iPSCs诱导和鉴定 | 第66-74页 |
| 1 引言 | 第66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-67页 |
| ·试验动物 | 第66页 |
| ·细胞株 | 第66页 |
| ·试剂耗材及溶液配制 | 第66-67页 |
| ·试验仪器 | 第67页 |
| ·试验方法 | 第67页 |
| 3 试验结果 | 第67-72页 |
| ·不同来源克隆奶山羊耳成纤维细胞生长曲线分析 | 第67-68页 |
| ·细胞转基因鉴定 | 第68-69页 |
| ·山羊iPSCs形态学分析 | 第69页 |
| ·细胞核型分析 | 第69-70页 |
| ·碱性磷酸酶检测 | 第70页 |
| ·山羊iPSCs多能蛋白表达 | 第70-71页 |
| ·山羊iPSCs在体外形成类胚体 | 第71页 |
| ·TgiPSCs在体内形成畸胎瘤 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| ·TgiPSCs诱导和鉴定 | 第72-73页 |
| ·TgiPSCs核型分析 | 第73-74页 |
| 第七章 GiPSCs,克隆山羊iPSCs和tgiPSCs诱导差异 | 第74-84页 |
| 1 引言 | 第74页 |
| 2 材料与方法 | 第74-75页 |
| ·细胞株 | 第74页 |
| ·试剂耗材及溶液配制 | 第74页 |
| ·试验仪器 | 第74页 |
| ·试验方法 | 第74-75页 |
| 3 试验结果 | 第75-81页 |
| ·不同来源山羊耳成纤维细胞和病毒感染后细胞生长曲线分析 | 第75-77页 |
| ·不同来源山羊耳成纤维细胞重编程产生克隆效率和克隆质量的差异 | 第77-78页 |
| ·不同山羊iPSCs内源多能基因表达差异 | 第78-81页 |
| 4 讨论 | 第81-84页 |
| ·TgiPSCs重编程效率的分析 | 第81页 |
| ·TgiPSCs和giPSCs生物学特征的比较 | 第81-84页 |
| 第八章 转基因克隆奶山羊来源的IPSCS参与核移植胚胎的发育 | 第84-94页 |
| 1 引言 | 第84页 |
| 2 材料与方法 | 第84-87页 |
| ·细胞株 | 第84页 |
| ·试剂耗材及溶液配制 | 第84-85页 |
| ·试验仪器 | 第85页 |
| ·试验方法 | 第85-87页 |
| 3 试验结果 | 第87-90页 |
| ·不同来源的供体细胞对克隆胚胎融合率和卵裂率的影响 | 第87页 |
| ·giPSCs,tgiPSCs以及vivo-embryos内源性多能基因表达差异 | 第87-89页 |
| ·TgFs和tgiPSCs核移植胚IGF家族基因表达的影响 | 第89页 |
| ·对tgFs,tgiPSCs和tgiPSCs来源的畸胎瘤进行PCR检测 | 第89-90页 |
| 4 讨论 | 第90-94页 |
| ·GiPSCs和tgiPSCs重编程效果的分析 | 第91页 |
| ·TgiPSCs对核移植胚胎发育的影响 | 第91-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 全文结论 | 第110-112页 |
| 创新点和进一步研究的课题 | 第112-114页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
