| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 附录 | 第8-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-26页 |
| ·NPM-ALK简介 | 第12-14页 |
| ·间变性大细胞淋巴瘤(ALCL) | 第12页 |
| ·间变性淋巴瘤激酶(ALK) | 第12-13页 |
| ·NPM-ALK | 第13页 |
| ·ALK+ALCL的研究现状 | 第13-14页 |
| ·NPM-ALK的作用机制网络 | 第14-21页 |
| ·Jak/Stat信号通路 | 第14-16页 |
| ·PI3K/Akt信号通路 | 第16-18页 |
| ·CD30 | 第18页 |
| ·PLC-γ | 第18-19页 |
| ·Grb2/She/insulin receptor substrate-1/Ras PLC-γ | 第19页 |
| ·Myc | 第19页 |
| ·Src | 第19-20页 |
| ·Hsp90 | 第20页 |
| ·SNT/FRS2 | 第20页 |
| ·NIPA | 第20页 |
| ·p130Cas | 第20-21页 |
| ·NPM-ALK与IGF-1R的相互作用 | 第21-24页 |
| ·IGF-1R | 第21-22页 |
| ·IGF-1R与NPM-ALK | 第22-24页 |
| ·中国传统药物 | 第24页 |
| ·研究目的和内容 | 第24-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·材料 | 第26-34页 |
| ·仪器 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第27-32页 |
| ·主要试剂配制 | 第32-34页 |
| ·方法 | 第34-44页 |
| ·定点突变 | 第34-36页 |
| ·质粒重组 | 第36页 |
| ·细胞培养 | 第36-37页 |
| ·细胞生存率的测定 | 第37-38页 |
| ·细胞转染 | 第38-39页 |
| ·流式细胞术分选细胞 | 第39页 |
| ·Western Blot | 第39-40页 |
| ·免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP) | 第40-41页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第41-42页 |
| ·软琼脂克隆形成 | 第42页 |
| ·细胞形态观察 | 第42-43页 |
| ·PI染色检测细胞周期 | 第43页 |
| ·高效液相色谱分析 | 第43页 |
| ·数据分析 | 第43-44页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第44-68页 |
| ·基因定点突变 | 第44-48页 |
| ·重叠延伸PCR | 第44页 |
| ·酶切 | 第44-45页 |
| ·转化及验证 | 第45-48页 |
| ·质粒重组 | 第48页 |
| ·目的片段PCR | 第48页 |
| ·酶切、连接及转化验证 | 第48页 |
| ·重组质粒瞬时转染293T细胞 | 第48-51页 |
| ·原位染色检测转染试剂效率 | 第48-49页 |
| ·荧光显微镜检测质粒表达 | 第49-50页 |
| ·RT-PCR检测NPM-ALK的表达 | 第50页 |
| ·Western Blot检测NPM-ALK的表达 | 第50-51页 |
| ·重组质粒在293T细胞内的功能性研究 | 第51页 |
| ·表达重组质粒的Jurkat稳定细胞系的构建 | 第51-53页 |
| ·转染Jurkat细胞并压力筛选 | 第51-52页 |
| ·流式细胞术筛选GFP阳性细胞 | 第52页 |
| ·RT-PCR检测稳定细胞系中重组质粒NPM-ALK的mRNA表达 | 第52-53页 |
| ·NPM-ALK双点突变对稳定细胞系细胞功能性研究 | 第53-55页 |
| ·IP检测NPM-ALK双点突变对稳定细胞系中NPM-ALK磷酸化蛋白的表达 | 第53页 |
| ·IP检测NPM-ALK双点突变对稳定细胞系中IGF-1R及其磷酸化蛋白的表达 | 第53-54页 |
| ·Western Blot检测NPM-ALK双点突变对其下游信号分子的影响 | 第54-55页 |
| ·NPM-ALK双点突变对稳定细胞系细胞生存力的影响 | 第55-56页 |
| ·CCK-8检测双点突变对细胞生存率的影响 | 第55页 |
| ·细胞计数检测双点突变对细胞增殖的影响 | 第55页 |
| ·软克隆琼脂实验检测双点突变对细胞致癌力的影响 | 第55-56页 |
| ·NPM-ALK双点突变对稳定细胞系细胞周期的影响 | 第56-58页 |
| ·PI染色检测细胞周期 | 第56-57页 |
| ·Western Blot检测周期相关蛋白表达量的变化 | 第57页 |
| ·Real-time PCR检测周期相关蛋白mRNA表达量的变化 | 第57-58页 |
| ·NPM-ALK双点的突变作为药筛的靶点 | 第58-61页 |
| ·PPP对NPM-ALK双点突变型的作用 | 第58-59页 |
| ·香椿与麝香的中药混合制剂对NPM-ALK双点突变型的作用 | 第59-61页 |
| ·中药混合制剂的作用机制 | 第61-68页 |
| ·CCK-8 Kit检测中药混合制剂对细胞生存率的影响 | 第61-62页 |
| ·HPLC检测中药混合制剂与香椿的差异 | 第62-63页 |
| ·中药混合制剂对细胞凋亡、自噬的影响 | 第63-64页 |
| ·中药混合制剂对细胞周期的影响 | 第64-68页 |
| 第4章 讨论 | 第68-71页 |
| 第5章 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 已发表或已录用的论文 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
