| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-33页 |
| ·鸽新城疫的研究概况 | 第16-22页 |
| ·病原学特性 | 第17-19页 |
| ·流行病学 | 第19页 |
| ·临床症状和剖检病变 | 第19-20页 |
| ·诊断 | 第20-22页 |
| ·防治 | 第22页 |
| ·新城疫分子生物学研究进展 | 第22-33页 |
| ·新城疫病毒的形态和分子结构蛋白及功能 | 第23-26页 |
| ·新城疫病毒致病力的分子基础 | 第26-27页 |
| ·新城疫的分子流行病学研究 | 第27-30页 |
| ·鸽新城疫基因工程疫苗研究 | 第30-33页 |
| 第二章 鸽新城疫疫苗的研究 | 第33-52页 |
| ·材料和方法 | 第35-40页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·制苗用毒株 | 第35页 |
| ·试验动物 | 第35页 |
| ·试剂药品 | 第35页 |
| ·仪器设备 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·种毒的制备 | 第35-36页 |
| ·病毒的灭活 | 第36-37页 |
| ·油乳剂灭活疫苗的制备 | 第37页 |
| ·蜂胶苗的配制 | 第37-38页 |
| ·油乳剂灭活苗物理性状检验 | 第38页 |
| ·蜂胶佐剂灭活苗物理性状检验 | 第38-39页 |
| ·疫苗免疫抗体产生时间的测定 | 第39页 |
| ·疫苗最佳免疫剂量测定 | 第39页 |
| ·疫苗免疫持续期的测定 | 第39-40页 |
| ·疫苗保存期试验 | 第40页 |
| ·对比试验 | 第40页 |
| ·区域试验 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-49页 |
| ·制苗用毒在鸡胚上增殖 | 第40-41页 |
| ·病毒的灭活 | 第41-42页 |
| ·温度对病毒灭活 | 第41页 |
| ·甲醛对病毒灭活 | 第41-42页 |
| ·安全性检查 | 第42页 |
| ·油乳剂灭活疫苗物理性状检验 | 第42-43页 |
| ·外观检查 | 第42页 |
| ·粘度检验 | 第42页 |
| ·均匀度检验 | 第42-43页 |
| ·剂型检验 | 第43页 |
| ·稳定性检验 | 第43页 |
| ·蜂胶佐剂灭活疫苗物理性状检验 | 第43-46页 |
| ·外观检查 | 第43页 |
| ·无菌检验 | 第43页 |
| ·安全性检验 | 第43-44页 |
| ·急性毒性试验 | 第44-46页 |
| ·疫苗免疫效力对比试验 | 第46-47页 |
| ·疫苗免疫持续期试验 | 第47-48页 |
| ·疫苗保存期试验 | 第48页 |
| ·鸽源和鸡源油乳剂灭活苗对比试验 | 第48-49页 |
| ·区域试验 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| 第三章 鸽新城疫 F 基因的克隆及序列分析 | 第52-61页 |
| ·材料与方法 | 第52-54页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·病毒 | 第52页 |
| ·菌株、载体 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·引物设计与合成 | 第53页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第53页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第53-54页 |
| ·基因的克隆与鉴定 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-59页 |
| ·F 基因的克隆鉴定 | 第54-55页 |
| ·F 基因 DNA 序列测定结果 | 第55-56页 |
| ·核苷酸相似性分析 | 第56-57页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第57-58页 |
| ·裂解位点的氨基酸序列分析 | 第58页 |
| ·系统发育树的建立 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 鸽新城疫 F 基因的原核表达分析及其生物活性研究 | 第61-78页 |
| ·实验材料 | 第61-64页 |
| ·菌种、载体 | 第61页 |
| ·酶与试剂 | 第61-62页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第62-63页 |
| ·仪器与设备 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-71页 |
| ·鸽新城疫 F 基因原核表达载体的构建 | 第64-68页 |
| ·表达引物的设计 | 第64页 |
| ·目的片段的 PCR 扩增 | 第64页 |
| ·进行 PCR 产物凝胶回收与纯化 | 第64-65页 |
| ·目的片段和载体的酶切与回收 | 第65-66页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第66页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第66页 |
| ·连接产物的转化 | 第66-67页 |
| ·重组质粒的提取 | 第67页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第67-68页 |
| ·重组菌的诱导表达与表达条件的优化 | 第68-70页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第68页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第68-69页 |
| ·表达条件的优化 | 第69页 |
| ·包涵体蛋白的提取 | 第69-70页 |
| ·ELISA 方法的初步建立 | 第70-71页 |
| ·抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第70页 |
| ·间接 ELISA 各工作条件的摸索 | 第70-71页 |
| ·结果 | 第71-75页 |
| ·重组表达载体的构建与鉴定 | 第71-72页 |
| ·融合蛋白的可溶性鉴定 | 第72-74页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第72-73页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第73页 |
| ·纯化蛋白的浓度 | 第73-74页 |
| ·ELISA 筛选方法的建立 | 第74-75页 |
| ·最佳抗原及抗体工作浓度的确定 | 第74页 |
| ·一抗作用时间的确定 | 第74-75页 |
| ·二抗作用时间的确定 | 第75页 |
| ·底物显色液作用时间的确定 | 第75页 |
| ·分析与讨论 | 第75-77页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| 第五章 鸽新城疫 F 基因在毕赤酵母中的表达 | 第78-87页 |
| ·材料 | 第78-80页 |
| ·菌种和载体 | 第78页 |
| ·试剂和培养基 | 第78页 |
| ·培养基 | 第78-79页 |
| ·仪器与设备 | 第79-80页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K- PPMV-1-的构建 | 第80-84页 |
| ·引物的设计与合成 | 第80-82页 |
| ·目的基因的扩增 | 第80页 |
| ·胶回收目的基因 | 第80页 |
| ·目的基因与 pPIC9K 空载体的双酶切 | 第80-81页 |
| ·双酶切目的片段与 pPIC9K 空载体的电泳回收 | 第81页 |
| ·JM109 感受态细胞的制备 | 第81页 |
| ·目的基因与 pPIC9K 空载体的连接 | 第81页 |
| ·连接产物的转化 | 第81页 |
| ·重组表达质粒的提取与鉴定 | 第81-82页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K- PPMV-1-F 电转化毕赤酵母 GS115 | 第82页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第82页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第82页 |
| ·电激法转化 | 第82页 |
| ·高拷贝重组酵母菌株的筛选鉴定 | 第82-83页 |
| ·影印接种法筛选 G418 抗性菌株 | 第82-83页 |
| ·PCR 法鉴定重组菌株 | 第83页 |
| ·重组酵母菌株的诱导表达 | 第83页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-85页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K- PPMV-1-F 的 PCR 与双酶切鉴定 | 第84-85页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·结论 | 第86-87页 |
| 第六章 鸽新城疫 F 基因的真核表达分析及其生物活性研究 | 第87-98页 |
| ·材料 | 第87-88页 |
| ·菌种和载体 | 第87页 |
| ·试剂和培养基 | 第87页 |
| ·培养基 | 第87-88页 |
| ·仪器与设备 | 第88页 |
| ·方法 | 第88-93页 |
| ·鸽新城疫真核表达载体的构建 | 第88-92页 |
| ·表达引物的设计 | 第88页 |
| ·目的片段的 PCR 扩增 | 第88-89页 |
| ·进行 PCR 产物凝胶回收与纯化 | 第89-90页 |
| ·目的片段和载体的酶切与回收 | 第90页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第90页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第90-91页 |
| ·连接产物的转化 | 第91页 |
| ·重组质粒的提取 | 第91-92页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第92页 |
| ·鸽新城疫真核表达质粒免疫原性研究 | 第92-93页 |
| ·免疫用重组质粒的制备与纯化 | 第92-93页 |
| ·动物基因免疫 | 第93页 |
| ·攻毒保护试验 | 第93页 |
| ·结果 | 第93-95页 |
| ·重组表达载体的构建与鉴定 | 第93-94页 |
| ·动物基因免疫 | 第94-95页 |
| ·攻毒保护试验 | 第95页 |
| ·分析与讨论 | 第95-96页 |
| ·结论 | 第96-98页 |
| 附录 | 第98-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 个人简介 | 第123-124页 |
| 导师简介 | 第124-127页 |
