| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词英文对照表 | 第10-18页 |
| 第一部分：文献综述 | 第18-32页 |
| 1 脑心肌炎病毒(EMCV)概述 | 第18-23页 |
| ·EMCV的病原学 | 第18-19页 |
| ·EMCV的基因组结构 | 第19-21页 |
| ·病毒的蛋白结构及功能 | 第19-21页 |
| ·结构蛋白及其功能 | 第19-20页 |
| ·非结构蛋白及其功能 | 第20-21页 |
| ·EMCV的流行情况 | 第21页 |
| ·EMCV的诊断技术 | 第21-23页 |
| ·EMCV 血清学检测 | 第22页 |
| ·EMCV病原学检测 | 第22-23页 |
| 2 环介导等温扩增技术(LAMP技术) | 第23-27页 |
| ·LAMP原理及特点 | 第23-26页 |
| ·LAMP引物的设计 | 第23-24页 |
| ·LAMP反应原理 | 第24-25页 |
| ·LAMP反应特点 | 第25-26页 |
| ·LAMP技术的应用 | 第26-27页 |
| ·LAMP技术在病毒诊断中的应用 | 第27页 |
| ·LAMP技术在细菌诊断中的应用 | 第27页 |
| ·LAMP技术在寄生虫检测中的应用 | 第27页 |
| 3 实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR技术) | 第27-30页 |
| ·Real-time PCR技术的原理及特点 | 第28-29页 |
| ·Real-time PCR技术的反应原理 | 第28页 |
| ·Real-time PCR的种类 | 第28-29页 |
| ·Real-time PCR的应用 | 第29-30页 |
| ·Real-time PCR在基因工程研究领域的应用 | 第29页 |
| ·Real-time PCR在医学研究领域的应用 | 第29页 |
| ·其他领域 | 第29-30页 |
| 4 本论文研究的目的及意义 | 第30-32页 |
| 第二部分：试验研究 | 第32-67页 |
| 第一章 EMCV LAMP方法的建立 | 第32-38页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第32-33页 |
| ·主要材料 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 2 试验步骤及方法 | 第33-35页 |
| ·病毒总RNA提取 | 第33页 |
| ·逆转录 | 第33-34页 |
| ·LAMP引物设计及合成 | 第34页 |
| ·EMCV LAMP扩增反应 | 第34-35页 |
| ·EMCV LAMP扩增方法的最佳引物筛选 | 第35页 |
| 3 试验结果 | 第35-37页 |
| ·EMCV LAMP引物的设计结果 | 第35页 |
| ·引物合成及配制 | 第35页 |
| ·EMCV LAMP扩增反应结果 | 第35-36页 |
| ·最佳引物筛选结果 | 第36-37页 |
| 4 小结与分析 | 第37-38页 |
| 第二章 EMCV LAMP法条件优化、质控及应用 | 第38-47页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第38-39页 |
| ·主要材料 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 2 试验步骤及方法 | 第39-41页 |
| ·EMCV LAMP反应体系的条件优化 | 第39-40页 |
| ·EMCV LAMP反应体系中Tm值的优化 | 第39页 |
| ·EMCV LAMP反应体系中最佳外引物用量的优化 | 第39页 |
| ·EMCV LAMP反应体系中最佳内引物用量的优化 | 第39页 |
| ·EMCV LAMP反应体系中最佳反应时间的优化 | 第39-40页 |
| ·EMCV LAMP方法的特异性检测 | 第40页 |
| ·EMCV LAMP方法的灵敏性检测 | 第40页 |
| ·EMCV LAMP方法的重复性检测 | 第40-41页 |
| ·EMCV LAMP法对田间样品的检测 | 第41页 |
| 3 试验结果 | 第41-45页 |
| ·EMCV LAMP反应体系优化结果 | 第41-43页 |
| ·EMCV LAMP反应最佳Tm值的确定 | 第41页 |
| ·EMCV LAMP反应最佳内外引物用量的确定 | 第41-42页 |
| ·EMCV LAMP反应最佳反应时间的确定 | 第42-43页 |
| ·EMCV LAMP法的特异性验证结果 | 第43-44页 |
| ·EMCV LAMP法的灵敏性验证结果 | 第44页 |
| ·EMCV LAMP法的重复性验证结果 | 第44-45页 |
| ·田间样本检测结果 | 第45页 |
| 4 小结与分析 | 第45-47页 |
| 第三章 EMCV Real-time PCR检测方法的建立 | 第47-53页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第47-48页 |
| ·主要材料 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| 2 试验步骤及方法 | 第48-50页 |
| ·病毒总RNA提取 | 第48页 |
| ·逆转录 | 第48-49页 |
| ·引物和探针的设计 | 第49页 |
| ·引物和探针的合成 | 第49页 |
| ·EMCV Real-time PCR扩增反应 | 第49-50页 |
| ·引物及探针的最佳组合优选 | 第50页 |
| 3 试验结果 | 第50-51页 |
| ·引物与探针的设计结果 | 第50页 |
| ·引物与探针的合成及使用 | 第50页 |
| ·EMCV Real-time PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| ·引物及探针组合筛选结果 | 第51页 |
| 4 小结与分析 | 第51-53页 |
| 第四章 EMCV Real-time PCR法条件优化、质控及应用 | 第53-67页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第53-54页 |
| ·主要材料 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| 2 试验步骤及方法 | 第54-59页 |
| ·EMCV Real-time PCR法反应体系的优化 | 第54-55页 |
| ·引物最佳使用浓度的优化 | 第54-55页 |
| ·探针最佳使用浓度的优化 | 第55页 |
| ·最佳Tm值的优化 | 第55页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第55-58页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第55-58页 |
| ·病毒总RNA提取 | 第56页 |
| ·逆转录 | 第56页 |
| ·PCIU广土曾 | 第56页 |
| ·目的基因PCR产物的纯化与回收 | 第56-57页 |
| ·目的基因与pMD-18T载体的连接 | 第57页 |
| ·连接物的转化、单克隆 | 第57页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第57-58页 |
| ·序列测定 | 第58页 |
| ·重组质粒浓度的测定 | 第58页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第58页 |
| ·EMCV Real-time PCR法的特异性验证 | 第58页 |
| ·EMCV Real-time PCR法的灵敏性验证 | 第58页 |
| ·EMCV Real-time PCR法的可重复性 | 第58页 |
| ·结果判定标准 | 第58-59页 |
| ·EMCV Real-time PCR法对田间样品的检测 | 第59页 |
| 3 试验结果 | 第59-66页 |
| ·最佳引物使用浓度筛选结果 | 第59-60页 |
| ·探针最佳使用浓度筛选 | 第60页 |
| ·Tm值优化结果 | 第60-61页 |
| ·标准曲线的绘制结果 | 第61-64页 |
| ·PCR产物扩增与纯化、回收结果 | 第61-62页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第62页 |
| ·序列测定结果 | 第62-63页 |
| ·质粒浓度的测定及拷贝数计算 | 第63页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第63-64页 |
| ·EMCV Real-time PCR法的特异性 | 第64页 |
| ·EMCV Real-time PCR法的灵敏性 | 第64-65页 |
| ·EMCV Real-time PCR法的可重复性 | 第65页 |
| ·田间样本检测结果 | 第65-66页 |
| 4 小结与分析 | 第66-67页 |
| 第三部分：结论 | 第67-69页 |
| ·EMCV LAMP检测方法的建立 | 第67页 |
| ·EMCV LAMP法条件优化、质控及应用 | 第67页 |
| ·EMCV Real-time PCR检测方法的建立 | 第67页 |
| ·EMCV Real-time PCR法条件优化、质控及应用 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
| 硕士期间已发表论文 | 第76页 |
| 硕士期间参与的课题研究 | 第76页 |
