| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-19页 |
| 1 无乳链球菌特征 | 第12页 |
| ·无乳链球菌分类地位、形态及特点 | 第12页 |
| ·无乳链球菌分子型别 | 第12页 |
| 2 无乳链球菌对罗非鱼养殖业的危害 | 第12-13页 |
| ·致病性及危害 | 第12-13页 |
| ·症状及流行病学 | 第13页 |
| 3 罗非鱼链球菌病的防治现状 | 第13-16页 |
| ·药物防治 | 第13-14页 |
| ·生态防治 | 第14页 |
| ·疫苗防治 | 第14-16页 |
| 4 无乳链球菌表面蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| ·LrrG 蛋白 | 第17页 |
| ·Sip 蛋白 | 第17-18页 |
| ·C5a 肽酶 | 第18页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第一章 罗非鱼无乳链球菌 scpB 基因的克隆及原核表达质粒的构建 | 第19-38页 |
| 1 材料与方法 | 第19-25页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19-20页 |
| ·培养基及缓冲液的配制 | 第20页 |
| ·引物设计与合成 | 第20-21页 |
| ·无乳链球菌 scpB 基因的 PCR 扩增 | 第21-23页 |
| ·scpB 基因克隆质粒的构建 | 第23页 |
| ·scpB 基因核酸序列特征分析 | 第23页 |
| ·ScpB 氨基酸序列特征分析 | 第23页 |
| ·ScpB 氨基酸序列的同源性分析 | 第23页 |
| ·scpB 基因重组表达质粒的构建 | 第23-25页 |
| 2 结果 | 第25-35页 |
| ·无乳链球菌 scpB 基因的 PCR 扩增及 T 克隆鉴定 | 第25-26页 |
| ·scpB 基因核酸序列分析 | 第26-27页 |
| ·ScpB 氨基酸序列特征分析 | 第27-32页 |
| ·ScpB 氨基酸序列抗原性分析 | 第32-35页 |
| ·ScpB 蛋白氨基酸序列的同源性分析 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-38页 |
| 第二章 罗非鱼无乳链球菌 C5a 肽酶的原核表达及其免疫原性研究 | 第38-56页 |
| 1 材料和方法 | 第38-48页 |
| ·菌株和实验动物 | 第38页 |
| ·酶和试剂 | 第38-39页 |
| ·溶液和缓冲液 | 第39-41页 |
| ·无乳链球菌 scpB 基因扩增及克隆 | 第41页 |
| ·scpB 基因表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·ScpB 蛋白的诱导表达和 SDS-PAGE 分析 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白包涵体复性 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的 Western blot 分析及其免疫与攻毒试验 | 第45-46页 |
| ·免疫罗非鱼血清采集及免疫指标分析 | 第46-47页 |
| ·血清抗体水平的测定 | 第47-48页 |
| ·数据处理 | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-53页 |
| ·scpB 基因克隆和重组表达质粒的构建与鉴定 | 第48-50页 |
| ·ScpB 蛋白的诱导表达、纯化及 Western blot 分析 | 第50页 |
| ·ScpB 蛋白的免疫保护及攻毒试验 | 第50-52页 |
| ·血清溶菌酶(LSZ)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定 | 第52页 |
| ·血清抗体水平 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| 第三章 PLGA 为佐剂的 C5a 肽酶纳米疫苗对预防罗非鱼链球菌病的免疫效果研究 | 第56-65页 |
| 1 材料和方法 | 第56-58页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·超声乳化法制备纳米粒 | 第57页 |
| ·微球载药率和包封率的测定 | 第57页 |
| ·载药微球体外释放行为的测定 | 第57页 |
| ·罗非鱼的免疫与攻毒试验 | 第57-58页 |
| ·免疫罗非鱼血清采集及免疫指标分析 | 第58页 |
| ·血清抗体水平的测定 | 第58页 |
| ·数据处理 | 第58页 |
| 2 结果 | 第58-62页 |
| ·微球的形态特征 | 第58页 |
| ·微球载药率和包封率的测定 | 第58页 |
| ·载药微球体外释放行为的测定 | 第58-59页 |
| ·ScpB 蛋白的免疫保护及攻毒试验 | 第59-60页 |
| ·血清溶菌酶(LSZ)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定 | 第60-61页 |
| ·血清抗体水平 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
| 附录一 缩略词表 | 第78-79页 |
| 附录二 表达载体 pET32a(+)图谱 | 第79-80页 |
| 附录三 在读期间发表论文情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
