| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-19页 |
| 1 Bt 杀蚊研究概况 | 第10-11页 |
| 2 ICPs 的结构与功能 | 第11-13页 |
| ·Cry 的三维结构与功能的相关性 | 第11-13页 |
| ·Cyt 的三维结构与功能的相关性 | 第13页 |
| 3 Cry 毒素的受体 | 第13-15页 |
| ·CADR | 第13-14页 |
| ·APN | 第14页 |
| ·ALP | 第14-15页 |
| ·糖脂类复合物 | 第15页 |
| ·α-淀粉酶 | 第15页 |
| 4 几种分离受体方法的比较 | 第15-16页 |
| ·基于双向电泳与配体迹的分离方法 | 第15页 |
| ·亲和纯化手段 | 第15-16页 |
| 5 ICPs 对鳞翅目的作用机制 | 第16-17页 |
| ·Bravo 模型 | 第16页 |
| ·Zhang 模型 | 第16页 |
| ·Jurat-Fuentes 模型 | 第16-17页 |
| 6 ICPs 对双翅目的作用机制 | 第17-18页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第一章 Bt LLP29 cry11Aa4 的克隆、表达与活性测定 | 第19-38页 |
| 1 材料与方法 | 第19-32页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·供试菌株、蚊子 | 第19页 |
| ·质粒载体 | 第19页 |
| ·酶与试剂 | 第19-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-32页 |
| ·Bt 基因组 DNA 的提取 | 第21页 |
| ·cry11A 基因的克隆 | 第21-26页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·高保真酶PCR扩增 | 第22页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物加 A 尾 | 第23页 |
| ·克隆载体的构建 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·转化和筛选 | 第24-25页 |
| ·碱裂解法提取 E. coli 质粒 | 第25页 |
| ·克隆重组质粒的酶切分析 | 第25-26页 |
| ·测序 | 第26页 |
| ·cry11A 基因的原核表达 | 第26-29页 |
| ·质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·质粒双酶切 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶中酶切产物的回收 | 第27页 |
| ·酶切回收产物连接 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| ·转化和筛选 | 第28页 |
| ·表达重组质粒的酶切验证 | 第28页 |
| ·重组融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第28-29页 |
| ·Bradford 法测定蛋白浓度 | 第29页 |
| ·表达蛋白 Cry11A 的 SDS-PAGE 检测 | 第29-31页 |
| ·生物测定 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-38页 |
| ·cry11A 基因的克隆及序列分析 | 第32-33页 |
| ·PCR 扩增及克隆重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·序列测定 | 第32-33页 |
| ·序列同源性分析 | 第33页 |
| ·cry11A 基因的原核表达 | 第33-36页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·原核表达载体的 PCR 及酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白诱导表达 | 第35-36页 |
| ·生物测定 | 第36-38页 |
| 第二章 致倦库蚊中肠与毒素特异性结合受体的研究 | 第38-45页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·试验材料 | 第38页 |
| ·供试蚊虫 | 第38页 |
| ·试剂与耗材 | 第38页 |
| ·主要缓冲液 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-41页 |
| ·Cry11Aa 兔源多克隆抗体血清的制备 | 第38-39页 |
| ·效价测定 | 第39页 |
| ·Western blot 验证 | 第39页 |
| ·蚊子中肠刷状缘膜蛋白（BBMV）的提取 | 第39页 |
| ·Western blot 分析 Cry11 与 BBMV 的结合 | 第39-40页 |
| ·BBMV 结合蛋白的分离 | 第40-41页 |
| ·Cry11 蛋白的生物素标记 | 第40页 |
| ·葡聚糖凝胶色谱分离活性片段 | 第40-41页 |
| ·Pulls down | 第41页 |
| ·质谱鉴定 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-45页 |
| ·Cry11 抗血清效价与 Western blot 验证 | 第41-42页 |
| ·Cry11 与 BBMV 的结合 | 第42-43页 |
| ·Pulls down 分离的结合蛋白 | 第43页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第43-45页 |
| 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
