| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-56页 |
| 第一章 Clusterin基因在奶牛乳腺炎中的研究进展 | 第16-34页 |
| 1 奶牛乳腺炎 | 第16-17页 |
| ·乳腺生理和病理机制 | 第16页 |
| ·乳腺炎危害及防治技术 | 第16-17页 |
| ·乳腺炎抗性育种方法与候选基因 | 第17页 |
| 2 Clusterin基因 | 第17-27页 |
| ·Clusterin基因的结构特征 | 第17-20页 |
| ·Clusterin基因的表达调控 | 第20-21页 |
| ·Clusterin基因的生理功能 | 第21-26页 |
| ·Clusterin基因在奶牛乳腺炎中的作用 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-34页 |
| 第二章 启动子、可变剪切和MicroRNA在奶牛乳腺炎中的研究进展 | 第34-56页 |
| 1 启动子 | 第34-35页 |
| ·启动子特征 | 第34页 |
| ·功能性SNP对启动子的调控及在乳腺炎中的作用 | 第34-35页 |
| ·Clusterin基因启动子在奶牛乳腺炎中的作用 | 第35页 |
| 2 可变剪切 | 第35-43页 |
| ·可变剪切特征 | 第35-39页 |
| ·可变剪切调控 | 第39-41页 |
| ·可变剪切作用 | 第41-42页 |
| ·Clusterin基因可变剪切在乳腺炎中的作用 | 第42-43页 |
| 3 MicroRNA | 第43-46页 |
| ·MiRNA特征 | 第43页 |
| ·MiRNA功能 | 第43-44页 |
| ·MiRNA在奶牛乳腺炎中的作用 | 第44-45页 |
| ·功能性SNP对miRNA与靶位点结合的调控 | 第45页 |
| ·MiRNA对Clusterin基因表达的调控 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-56页 |
| 第二部分 试验研究 | 第56-132页 |
| 第三章 Clusterin基因SNP检测及其与奶牛乳腺炎的相关性分析 | 第56-74页 |
| 1 实验材料 | 第56-57页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·血样采集 | 第56页 |
| ·奶样采集 | 第56-57页 |
| 2 实验方法 | 第57-59页 |
| ·DNA提取 | 第57页 |
| ·DNA浓度和纯度的检测 | 第57页 |
| ·DHI数据测定 | 第57页 |
| ·引物设计 | 第57-58页 |
| ·产物扩增 | 第58页 |
| ·PCR-SSCP | 第58-59页 |
| ·PCR-RFLP | 第59页 |
| ·银染显色 | 第59页 |
| 3 实验数据分析 | 第59-60页 |
| ·等位基因频率和基因型频率 | 第59页 |
| ·遗传多态性分析 | 第59-60页 |
| ·Hardy-Weinberg平衡检验 | 第60页 |
| ·连锁不平衡及单倍型分析 | 第60页 |
| ·数据统计分析 | 第60页 |
| 4 实验结果 | 第60-70页 |
| ·DNA模板 | 第60-61页 |
| ·DHI数据 | 第61页 |
| ·引物合成 | 第61-62页 |
| ·PCR产物和测序 | 第62-63页 |
| ·SNP分型 | 第63-64页 |
| ·多态遗传特性 | 第64-65页 |
| ·基因型与产奶性状相关性 | 第65-66页 |
| ·单倍型组合与产奶性状相关性 | 第66页 |
| ·不同胎次基因型与产奶性状相关性 | 第66-70页 |
| 5 讨论 | 第70-71页 |
| 6 小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 第四章 Clusterin基因乳腺特异启动子构建及功能验证 | 第74-92页 |
| 1 实验材料 | 第74页 |
| ·乳腺组织 | 第74页 |
| 2 实验方法 | 第74-81页 |
| ·引物设计 | 第74-75页 |
| ·产物扩增 | 第75页 |
| ·序列分析 | 第75页 |
| ·连接T3和转化 | 第75-78页 |
| ·双酶切和T4连接 | 第78页 |
| ·构建复合启动子表达载体 | 第78页 |
| ·293T细胞培养 | 第78-79页 |
| ·乳腺上皮细胞培养 | 第79页 |
| ·脂质体转染 | 第79页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第79-80页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第80页 |
| ·RNA浓度和纯度的检测 | 第80页 |
| ·反转录PCR | 第80-81页 |
| ·荧光定量PCR | 第81页 |
| ·数据处理 | 第81页 |
| 3 实验结果 | 第81-88页 |
| ·引物合成 | 第81-82页 |
| ·生物信息分析 | 第82-83页 |
| ·启动子克隆 | 第83-84页 |
| ·启动子表达载体 | 第84-85页 |
| ·启动子活性 | 第85-86页 |
| ·Clusterin基因表达 | 第86-87页 |
| ·Clusterin基因表达验证 | 第87-88页 |
| 4 讨论 | 第88-89页 |
| 5 小结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-92页 |
| 第五章 奶牛乳腺组织中Clusterin基因的可变剪切体鉴定及表达 | 第92-114页 |
| 1 实验材料 | 第92页 |
| ·乳腺组织 | 第92页 |
| 2 实验方法 | 第92-97页 |
| ·病原菌鉴定 | 第92页 |
| ·组织和细胞总RNA提取 | 第92-93页 |
| ·RNA浓度和纯度的检测 | 第93页 |
| ·反转录PCR | 第93页 |
| ·组织和细胞总蛋白提取 | 第93页 |
| ·蛋白浓度和纯度的检测 | 第93-94页 |
| ·引物设计 | 第94页 |
| ·产物扩增 | 第94页 |
| ·连接T3和转化 | 第94页 |
| ·生物信息分析 | 第94页 |
| ·荧光定量PCR | 第94页 |
| ·Western blot | 第94-97页 |
| ·表达载体构建 | 第97页 |
| ·乳腺上皮细胞培养 | 第97页 |
| ·脂质体转染 | 第97页 |
| 3 实验结果 | 第97-111页 |
| ·菌种鉴定 | 第97-98页 |
| ·引物合成 | 第98页 |
| ·可变剪切 | 第98-100页 |
| ·可变剪切模式 | 第100页 |
| ·生物信息预测 | 第100-107页 |
| ·Clusterin基因在乳腺组织的体内表达 | 第107-109页 |
| ·Clusterin基因在乳腺上皮细胞的体外表达 | 第109-111页 |
| 4 讨论 | 第111-112页 |
| 5 小结 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-114页 |
| 第六章 Clusterin基因3'UTR靶标确证奶牛乳腺炎抗性相关microRNA | 第114-132页 |
| 1 实验材料 | 第114页 |
| ·血样采集 | 第114页 |
| 2 实验方法 | 第114-116页 |
| ·DNA提取 | 第114页 |
| ·DNA浓度和纯度的检测 | 第114页 |
| ·引物设计 | 第114-115页 |
| ·产物扩增 | 第115页 |
| ·靶标miRNA预测 | 第115页 |
| ·3'UTR靶标表达克隆载体构建 | 第115页 |
| ·MicroRNA前体表达克隆载体构建 | 第115页 |
| ·共转染 | 第115页 |
| ·荧光素酶活性测定 | 第115-116页 |
| 3 实验结果 | 第116-128页 |
| ·引物合成 | 第116页 |
| ·PCR产物 | 第116页 |
| ·测序结果 | 第116-117页 |
| ·靶标miRNA分析 | 第117-122页 |
| ·乳腺炎抗性miRNA选择 | 第122-123页 |
| ·3'UTR靶标表达克隆载体 | 第123页 |
| ·MicroRNA前体表达克隆载体 | 第123-125页 |
| ·3'UTR靶标和miRNA前体表达克隆载体共转染 | 第125-128页 |
| ·靶标确证miRNA作用 | 第128页 |
| 4 讨论 | 第128-129页 |
| 5 小结 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-132页 |
| 全文结论 | 第132-134页 |
| 创新点 | 第134-136页 |
| 附录 | 第136-142页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
