| 致谢 | 第1-10页 |
| 图表一览表 | 第10-12页 |
| 主要英文缩写与译名 | 第12-14页 |
| 摘要 | 第14-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-35页 |
| ·miRNA的生物学特征 | 第20-25页 |
| ·动物miRNA生物合成 | 第21-22页 |
| ·miRNA靶基因的预测和鉴定 | 第22-24页 |
| ·miRNA作用机制 | 第24-25页 |
| ·miRNA检测技术 | 第25-29页 |
| ·传统的克隆技术 | 第25页 |
| ·Northern blotting技术 | 第25-26页 |
| ·Real-time PCR技术 | 第26页 |
| ·芯片技术 | 第26页 |
| ·Taqman-based芯片技术 | 第26-27页 |
| ·Bead-based技术 | 第27页 |
| ·NanoString读数技术 | 第27页 |
| ·新一代大规模测序技术 | 第27-28页 |
| ·miRNA检测技术的挑战 | 第28-29页 |
| ·奶牛miRNA的研究进展 | 第29-31页 |
| ·miRNA在奶牛中的研究进展 | 第29-30页 |
| ·miRNA对乳腺发育和泌乳的影响 | 第30-31页 |
| ·miRNA与乳腺糖代谢的关系 | 第31-33页 |
| ·糖代谢中的关键酶的作用 | 第31-32页 |
| ·miRNA调控己糖激酶的研究进展 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的、意义和内容 | 第33-35页 |
| ·研究的目的和意义 | 第33页 |
| ·研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 奶牛乳腺组织中miRNA的高通量测序 | 第35-45页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·主要试剂及配制 | 第35-36页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·组织总RNA提取 | 第36-37页 |
| ·RNA质量检测 | 第37-38页 |
| ·小RNA文库的构建 | 第38-40页 |
| ·高通量测序 | 第40页 |
| ·测序序列初步处理 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-43页 |
| ·奶牛乳腺组织RNA质量检验 | 第40-41页 |
| ·测序结果初步分析 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 奶牛乳腺组织miRNA的鉴定和特征分析 | 第45-61页 |
| ·材料与方法 | 第45-46页 |
| ·数据库的构建 | 第45-46页 |
| ·分析序列来源 | 第46页 |
| ·数据分析流程 | 第46页 |
| ·牛miRNA染色体定位分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-57页 |
| ·miRNA分类概述 | 第46-48页 |
| ·牛已知miRNA的特点 | 第48-49页 |
| ·牛保守miRNA的分析 | 第49-50页 |
| ·牛新发现miRNA的分析 | 第50-51页 |
| ·牛乳腺中pre-miRNA染色体定位分析 | 第51-54页 |
| ·Pre-miRNA基因簇分析 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-61页 |
| ·牛乳腺组织中miRNA的特征分析 | 第57-59页 |
| ·miRNA在牛基因组中的分布特征 | 第59-61页 |
| 第四章 泌乳期与非泌乳期奶牛乳腺中miRNA表达差异谱分析及功能预测 | 第61-77页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·实验动物 | 第61页 |
| ·实验试剂和材料 | 第61-62页 |
| ·实验仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-65页 |
| ·组织总RNA提取和质量检测 | 第62页 |
| ·miRNA芯片杂交 | 第62-63页 |
| ·实时定量PCR | 第63-64页 |
| ·miRNA靶基因预测 | 第64-65页 |
| ·靶基因的GO分析 | 第65页 |
| ·调控网络分析 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-72页 |
| ·miRNA在奶牛泌乳期和非泌乳期的差异表达芯片图谱 | 第65-67页 |
| ·Real-time PCR鉴定 | 第67-69页 |
| ·miRNA靶基因的预测及GO分析 | 第69-71页 |
| ·构建以泌乳为中心的网络 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-77页 |
| ·泌乳期和非泌乳期奶牛乳腺miRNA差异表达谱分析 | 第72-74页 |
| ·miRNA靶基因的预测 | 第74页 |
| ·miRNA与泌乳功能的关系 | 第74-77页 |
| 第五章 miRNA对泌乳相关基因的初步研究 | 第77-91页 |
| ·实验材料 | 第77-78页 |
| ·实验组织和细胞 | 第77页 |
| ·实验试剂 | 第77页 |
| ·实验仪器 | 第77-78页 |
| ·实验方法 | 第78-83页 |
| ·细胞培养 | 第78页 |
| ·细胞转染 | 第78-79页 |
| ·STAT5和HK2基因表达量检测 | 第79-81页 |
| ·STAT5和HK2蛋白表达量检测 | 第81-83页 |
| ·数据统计 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-88页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞(Mac-T)的培养和转染效率检测 | 第83-84页 |
| ·miR-141对STAT5的影响 | 第84-86页 |
| ·不同miRNA对HK2的影响 | 第86-88页 |
| ·讨论 | 第88-91页 |
| ·培养体系的选择 | 第88页 |
| ·miRNA对泌乳相关基因的影响 | 第88-91页 |
| 第六章 miRNA对奶牛乳腺糖代谢及关键酶的作用 | 第91-111页 |
| ·实验材料 | 第92页 |
| ·实验组织与细胞 | 第92页 |
| ·实验试剂 | 第92页 |
| ·实验仪器 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-101页 |
| ·乳腺组织中总RNA的提取 | 第92-93页 |
| ·克隆牛HK23’UTR片段 | 第93-97页 |
| ·构建包含HK23’UTR的报告基因载体 | 第97-99页 |
| ·HK2 3’UTR突变体的制备 | 第99-100页 |
| ·细胞培养和转染 | 第100页 |
| ·双荧光素酶报告系统检测 | 第100页 |
| ·蛋白含量检测 | 第100页 |
| ·糖激酶酶活检测 | 第100页 |
| ·葡萄糖含量检测 | 第100-101页 |
| ·数据处理与统计 | 第101页 |
| ·结果与分析 | 第101-106页 |
| ·3’RACE方法扩增HK2 3’UTR | 第101-102页 |
| ·构建包含牛HK2 3’UTR的带有荧光素酶报告基因重组载体 | 第102-105页 |
| ·荧光素酶报告基因表达分析 | 第105页 |
| ·miR-484对己糖激酶活力和细胞葡萄糖摄取的影响 | 第105-106页 |
| ·讨论 | 第106-111页 |
| ·miR-484靶基因的确认 | 第106-108页 |
| ·miRNA对糖代谢的影响 | 第108-111页 |
| 第七章 结论、创新点与展望 | 第111-113页 |
| ·结论 | 第111页 |
| ·主要创新点 | 第111-112页 |
| ·研究展望 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-129页 |
| 附录 | 第129-157页 |
| 作者简历及主要科研成果 | 第157-158页 |
