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茶树中三个与茶尺蠖取食诱导相关的肉桂醇脱氢酶(CAD)基因克隆与功能分析

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
目录第7-9页
图表清单第9-10页
1 文献综述第10-18页
   ·木质素组成及其分类第10页
   ·木质素的生物合成途径及其关键酶第10-13页
     ·苯丙烷(Phenylpropanoid)途径第11-13页
     ·木质素单体合成的特异途径第13页
   ·木质素在植物生物逆境中的作用第13-14页
   ·肉桂醇脱氢酶研究进展第14-18页
     ·肉桂醇脱氢酶的特征第14-15页
     ·肉桂醇脱氢酶的家族分布和分类第15页
     ·肉桂醇脱氢酶基因的克隆第15页
     ·肉桂醇脱氢酶基因的表达特征分析第15-18页
2 引言第18-20页
   ·研究意义与目的第18页
   ·研究内容和技术路线第18-20页
     ·研究内容第18-19页
     ·技术路线第19-20页
3 材料与方法第20-32页
   ·试验材料与处理第20页
     ·实验材料第20页
     ·试验处理第20页
   ·主要试剂与仪器第20-22页
     ·主要试剂第20页
     ·主要仪器设备第20-21页
     ·实验中主要试剂配方第21-22页
   ·方法第22-32页
     ·处理组与对照组茶树叶片总 RNA 提取第22-23页
     ·RNA 的检测第23页
     ·PCR 扩增产物的纯化回收和克隆第23-24页
     ·cDNA 第一链的合成第24页
     ·三个 CAD 基因的 cDNA 全长克隆第24-26页
     ·CAD 基因的生物信息学分析第26页
     ·三个 CAD 基因的原核表达第26-28页
     ·原核表达 CAD 的纯化,包涵体复性第28-29页
     ·原核表达 CAD 的酶活检测与酶学性质研究第29-30页
     ·三个 CAD 基因的 Southern blot 分析第30-31页
     ·三个 CAD 表达特征的 qRT-PCR 分析第31-32页
4 结果与分析第32-49页
   ·三个 CAD 基因的全长 CDNA克隆与序列分析第32-38页
     ·CAD 基因的 3’-RACE 克隆第32页
     ·CAD 基因的 5’-RACE 克隆第32-33页
     ·三个 CAD 基因的全长 cDNA 验证第33-34页
     ·三个 CAD 基因的序列分析第34-36页
     ·三个茶树 CAD 的序列同源比对和进化树分析第36-38页
   ·三个 CAD 基因的原核表达和蛋白纯化第38-41页
     ·CAD 基因的 ORF 扩增第38-39页
     ·重组表达载体的双酶切验证第39-40页
     ·三个 CAD 基因的原核表达和纯化第40页
     ·CAD2 上清中表达蛋白的条件优化第40-41页
   ·三个原核表达的 CAD 酶活检测和酶学性质研究第41-43页
     ·酶活检测第41-42页
     ·原核表达的 CAD2 酶学性质研究第42-43页
   ·三个 CAD 基因的 Southern blot 分析第43-44页
   ·三个 CAD 基因的表达特征分析第44-49页
     ·实时荧光定量 PCR 标准曲线的确定第44-45页
     ·茶尺蠖取食诱导三个 CAD 基因的表达特征分析第45页
     ·机械损伤诱导 CAD 基因的表达特征第45-46页
     ·MeJA、SA、ABA 处理对三个 CAD 基因表达的影响第46-49页
5 讨论第49-53页
   ·茶树 CAD 的结构特征,进化分类和 Southern blot 分析第49页
   ·原核表达,条件优化和蛋白纯化第49-50页
   ·包涵体复性和酶活测定第50页
   ·CAD 基因的表达特征分析第50-53页
6 结论第53-54页
参考文献第54-61页
附录A 英文缩写词汇表第61-62页
致谢第62-63页
作者简介第63页

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