| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 文献综述 | 第9-12页 |
| 1 PPO 简介 | 第9页 |
| 2 多酚氧化酶的结构 | 第9-10页 |
| 3 PPO 的活性调控 | 第10-11页 |
| 4 对病原微生物的黑化反应 | 第11页 |
| 5 PPO 研究的展望 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-26页 |
| ·实验材料 | 第13-17页 |
| ·质粒 | 第13页 |
| ·菌株及细胞 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·仪器设备与酶 | 第14-15页 |
| ·主要试剂的配制 | 第15-17页 |
| ·实验方法 | 第17-26页 |
| ·质粒构建 | 第17-21页 |
| ·引物设计与 PCR 扩增 | 第17-18页 |
| ·回收 PCR 凝胶产物 | 第18页 |
| ·目的基因连接到 pMD 18T 载体 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌（E.coli）Top10（或 BL21）转化 | 第19页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第19-20页 |
| ·质粒抽提 | 第20页 |
| ·双酶切 pMD 18T-PPO1/2/3 和 pET 28a | 第20页 |
| ·连接目的基因与表达载体 | 第20-21页 |
| ·转化、菌落 PCR 鉴定和测序验证 | 第21页 |
| ·原核基因诱导表达 | 第21-23页 |
| ·目的基因快速诱导表达 | 第21页 |
| ·小量蛋白诱导表达 | 第21-22页 |
| ·大量蛋白诱导表达 | 第22-23页 |
| ·Western blot 鉴定目的基因的表达 | 第23-24页 |
| ·纯化目的蛋白 | 第24页 |
| ·PPO 蛋白活性测定 | 第24-25页 |
| ·酶活测定 | 第24页 |
| ·颜色反应 | 第24-25页 |
| ·Native gel 检测 | 第25页 |
| ·S2 细胞培养 | 第25页 |
| ·目的基因在 S2 细胞中的转染和表达 | 第25-26页 |
| 3 实验结果与分析 | 第26-44页 |
| ·PPO1/2/3 基因的 PCR 扩增 | 第26页 |
| ·PPO1/2/3 基因在 T 载体上的克隆鉴定 | 第26-27页 |
| ·pMD 18T-PPO1/2/3 和 pET 28a 双酶切 | 第27-28页 |
| ·His-PPO1/2/3(His-pET 28a-PPO1/2/3)菌落 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·PPO1-His 和 His-PPO1/2/3 原核诱导表达和 Western blot 分析 | 第29-31页 |
| ·pET 28a-PPO1-His 不同诱导时间表达量比较 | 第31-32页 |
| ·不同条件（16℃和 37℃的原核表达和 S2 细胞真核表达）对 PPO1/2/3 表达影响的比较 | 第32-33页 |
| ·酒精和铜的先后顺序不影响 PPO1-His 的活性 | 第33-34页 |
| ·PPO1-His，His-PPO3 活性条件的摸索 | 第34-35页 |
| ·原核表达后的细菌用 30%酒精和 0.02%CPC 激活后酶活比较 | 第35-37页 |
| ·用 30%酒精激活不同条件表达 PPO（16℃和 37℃）的颜色反应 | 第37-39页 |
| ·PPO1-His、His-PPO1/2/3 表达量的 Western blot 比较及酶活比较 | 第39-40页 |
| ·PPO1-His，His-PPO3 Native gel 活性比较分析 | 第40-41页 |
| ·PPO1-His、His-PPO1/2/3 纯化及与铜离子的剂量效应 | 第41-44页 |
| 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 个人简介 | 第53页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第53页 |
