| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-36页 |
| ·蛋白质翻译后修饰 | 第15-23页 |
| ·磷酸化修饰 | 第16-17页 |
| ·蛋白激酶活性分析及其抑制剂筛选 | 第17-23页 |
| ·蛋白质直接电化学 | 第23-24页 |
| ·氧化还原蛋白质性质 | 第23-24页 |
| ·氧化还原蛋白质直接电化学行为 | 第24页 |
| ·生物纳米材料性质及传感应用 | 第24-34页 |
| ·碳纳米管 | 第25-26页 |
| ·金属纳米颗粒 | 第26-28页 |
| ·量子点 | 第28-32页 |
| ·石墨烯 | 第32-34页 |
| ·本文构思 | 第34-36页 |
| 第2章 基于未修饰量子点的聚集行为的无标记荧光检测蛋白激酶活性 | 第36-52页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·实验部分 | 第37-39页 |
| ·材料和仪器设备 | 第37-38页 |
| ·多肽引起量子点聚集 | 第38页 |
| ·检测PKA活性和抑制 | 第38页 |
| ·MCF-7细胞培养和裂解液的准备 | 第38-39页 |
| ·在细胞裂解液中激酶活性分析 | 第39页 |
| ·结果和讨论 | 第39-51页 |
| ·基于量子点的荧光响应区分S-多肽和P-多肽 | 第39-45页 |
| ·检测蛋白激酶活性和抑制 | 第45-50页 |
| ·在细胞裂解液中检测药物活化的PKA | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第3章 基于DNA-AUNPS的无标记电化学分析方法用于检测蛋白激酶活性及其抑制剂 | 第52-63页 |
| ·前言 | 第52-53页 |
| ·实验部分 | 第53-54页 |
| ·材料和试剂 | 第53页 |
| ·多肽在金电极上的自组装 | 第53页 |
| ·多肽在蛋白激酶催化下的磷酸化反应和抑制剂的抑制效果 | 第53页 |
| ·磷酸化位点识别和Zr~(4+)交联多肽磷酸化位点和DNA-AuNPs | 第53-54页 |
| ·电化学计时电量测量 | 第54页 |
| ·电化学阻抗表征 | 第54页 |
| ·结果和讨论 | 第54-62页 |
| ·实验设计方案 | 第54-55页 |
| ·修饰电极的表征 | 第55-57页 |
| ·电化学方法检测蛋白激酶活性 | 第57-61页 |
| ·抑制剂H-89的抑制作用 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第4章 基于多肽适配体的蛋白激酶一步法检测 | 第63-78页 |
| ·前言 | 第63-64页 |
| ·实验部分 | 第64-67页 |
| ·实验试剂 | 第64-65页 |
| ·QCM金电极上组装多肽适配体 | 第65-66页 |
| ·电化学检测过程 | 第66页 |
| ·RQCM进行PKA的特定识别和分析检测 | 第66页 |
| ·培养MCF-7 Cell和准备裂解液 | 第66-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-76页 |
| ·多肽组装QCM表面的构造与表征 | 第67-70页 |
| ·快速检测蛋白激酶PKA | 第70-73页 |
| ·IP_(20)-固定QCM对PKA检测的特异性 | 第73-74页 |
| ·MCF-7癌细胞裂解液中蛋白激酶分析 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第5章 基于磷酸化多肽降解受阻的石墨烯/多肽复合荧光探针用于蛋白激酶活性及抑制作用分析 | 第78-93页 |
| ·前言 | 第78-79页 |
| ·实验部分 | 第79-82页 |
| ·试剂及仪器设备 | 第79-80页 |
| ·氧化石墨烯与多肽FITC-pep之间的荧光淬灭 | 第80页 |
| ·羧肽酶消化多肽底物 | 第80页 |
| ·检测PKA活性和抑制作用 | 第80-81页 |
| ·MCF-7细胞培养和裂解液的准备 | 第81页 |
| ·在细胞裂解液中激酶活性分析 | 第81-82页 |
| ·结果与讨论 | 第82-92页 |
| ·石墨烯对FITC-peptide的荧光淬灭 | 第82-85页 |
| ·羧肽酶CPY对多肽的消化作用 | 第85-87页 |
| ·对激酶CKII活性检测 | 第87-89页 |
| ·对抑制剂Staurosporine、H89的筛选 | 第89-90页 |
| ·实验体系的普遍性和通用性 | 第90-91页 |
| ·细胞裂解液中激酶活性分析 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 第6章 玻碳电极表面纳米化应用于GOD的直接电化学 | 第93-102页 |
| ·前言 | 第93页 |
| ·实验部分 | 第93-94页 |
| ·设备和试剂 | 第93页 |
| ·仪器与测量 | 第93-94页 |
| ·表面纳米化玻碳电极制备 | 第94页 |
| ·结果与讨论 | 第94-101页 |
| ·玻碳电极的表面纳米化 | 第94-96页 |
| ·葡萄糖氧化酶在SNGC电极上的直接电化学 | 第96-99页 |
| ·Nf/GOD/SNGC电极的电催化行为 | 第99-101页 |
| ·小结 | 第101-102页 |
| 第7章 碳纳米管的电化学阴极处理以及对生化酶直接电化学的电催化传感应用 | 第102-114页 |
| ·前言 | 第102-103页 |
| ·实验部分 | 第103-104页 |
| ·试剂与材料 | 第103页 |
| ·装置与测量 | 第103页 |
| ·电极制备 | 第103-104页 |
| ·结果与讨论 | 第104-113页 |
| ·CM-CNT形貌表征 | 第104-105页 |
| ·阻抗表征 | 第105-106页 |
| ·GOD的直接电化学 | 第106-110页 |
| ·GOD/CM-CNTs/GC电极的电催化行为 | 第110-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 结论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-137页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
