| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 目次 | 第13-19页 |
| 第一章 引言 | 第19-30页 |
| ·钩端螺旋体 | 第19页 |
| ·钩端螺旋体病 | 第19-21页 |
| ·脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)与脂质A | 第21-26页 |
| ·LPS结构 | 第21-22页 |
| ·脂质A修饰及意义 | 第22-23页 |
| ·LPS生物学活性 | 第23-24页 |
| ·LPS的识别受体 | 第24页 |
| ·问号钩体LPS | 第24-26页 |
| ·论文研究内容及目的 | 第26-28页 |
| ·研究内容 | 第26-28页 |
| ·研究目的 | 第28页 |
| ·论文研究路线 | 第28-29页 |
| ·本论文创新之处 | 第29-30页 |
| 第二章 感染状态下问号钩端螺旋体LPS合成和装配基因表达水平差异及其活性的变化 | 第30-39页 |
| ·材料与方法 | 第30-33页 |
| ·主要试剂来源 | 第30页 |
| ·菌株和细胞株来源及培养 | 第30-31页 |
| ·Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris(EMJH)培养基 | 第31页 |
| ·问号钩体感染细胞模型 | 第31页 |
| ·问号钩体总RNA提取及cDNA合成 | 第31-32页 |
| ·芯片杂交及信号处理 | 第32页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第32页 |
| ·问号钩体LPS制备 | 第32-33页 |
| ·鲎试验 | 第33页 |
| ·统计学方法 | 第33页 |
| ·实验结果 | 第33-37页 |
| ·问号钩体感染细胞后LPS合成及装配基因的表达差异 | 第33-36页 |
| ·感染细胞前后问号钩体LPS促凝活性的变化 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 感染细胞后问号钩体LPS含量的变化 | 第39-47页 |
| ·材料与方法 | 第39-41页 |
| ·主要试剂来源 | 第39页 |
| ·菌株和细胞株来源及培养 | 第39页 |
| ·问号钩体感染细胞模型 | 第39页 |
| ·KDO试验 | 第39页 |
| ·Purpald试验 | 第39-40页 |
| ·Glc2N含量测定 | 第40-41页 |
| ·L-LPS SDS-PAGE及银染色 | 第41页 |
| ·统计学方法 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-45页 |
| ·感染细胞前后问号钩体LPS中KDO浓度的变化 | 第41页 |
| ·感染细胞前后问号钩体LPS的Purpald试验结果 | 第41-43页 |
| ·感染细胞前后问号钩体LPS中二氨基葡萄糖含量的变化 | 第43-44页 |
| ·感染细胞前后问号钩体LPS的SDS-PAGE图谱 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 感染细胞后问号钩体脂质A结构的改变 | 第47-55页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·主要试剂来源 | 第47页 |
| ·菌株和细胞株来源及培养 | 第47页 |
| ·问号钩体感染细胞模型 | 第47页 |
| ·LPS的制备 | 第47页 |
| ·问号钩体脂质A的提取、纯化及质谱检测 | 第47-48页 |
| ·不同结构脂质A的水解及质谱鉴定 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-53页 |
| ·感染J774A.1和THP-1后问号钩体脂质A的质谱图谱 | 第48-49页 |
| ·不同结构脂质A质谱鉴定 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 含不同结构脂质A的LPS活性及识别受体 | 第55-69页 |
| ·材料与方法 | 第55-57页 |
| ·主要试剂来源 | 第55页 |
| ·细胞株来源及培养 | 第55页 |
| ·基因敲除鼠来源 | 第55页 |
| ·不同结构LPS的鲎试验 | 第55页 |
| ·不同结构脂质A作用于THP-1和RAW264.7后细胞因子的检测 | 第55-56页 |
| ·小鼠腹腔巨噬细胞的收集 | 第56页 |
| ·人和鼠单核-巨噬细胞对不同结构脂质A的识别受体 | 第56-57页 |
| ·统计学方法 | 第57页 |
| ·实验结果 | 第57-66页 |
| ·不同结构LPS促凝活性 | 第57页 |
| ·不同结构脂质A作用于人单核-巨噬细胞THP-1后细胞因子的水平变化 | 第57-59页 |
| ·不同结构脂质A作用于小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7后细胞因子的水平变化 | 第59-60页 |
| ·人和鼠单核-巨噬细胞不同TLR受体对不同结构脂质A的识别 | 第60-66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| 第六章 脂质A结构变化的调节机制 | 第69-95页 |
| ·材料与方法 | 第69-81页 |
| ·主要试剂来源 | 第69页 |
| ·菌株和细胞株来源及培养 | 第69页 |
| ·问号钩体感染细胞模型 | 第69页 |
| ·不同pH和渗透压EMJH培养基的制备 | 第69页 |
| ·问号钩体Glc2N含量测定 | 第69页 |
| ·问号钩体总RNA提取及cDNA合成 | 第69-70页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第70页 |
| ·不同培养条件对脂质A主要合成基因表达量的影响 | 第70-71页 |
| ·问号钩体基因组DNA提取 | 第71页 |
| ·LA1745、LA2222、LA2541、LA3895和LA39965个pH相关二元信号系统基因的膜外部分PCR扩增、检测及回收 | 第71页 |
| ·LA1745等5个pH相关二元信号系统基因膜外部分的T-A克隆及鉴定 | 第71-72页 |
| ·LA1745等5个pH相关二元信号系统基因膜外部分的原核表达系统的构建及鉴定 | 第72-73页 |
| ·LA1745等5个pH相关二元信号系统基因膜外部分重组蛋白的小量诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第73-74页 |
| ·重组蛋白大量表达及纯化 | 第74页 |
| ·抗血清制备及Western blot检测 | 第74-75页 |
| ·号钩端螺旋体的抗体封闭 | 第75页 |
| ·LA0512(lpxD_1)、LA4326(lpxD_2)、LA4039(htrB)、LA2222、LA2541和LA3996的基因敲除 | 第75-79页 |
| ·基因敲除钩体菌株的PCR鉴定 | 第79页 |
| ·基因敲除钩体脂质A的提取及质谱鉴定 | 第79页 |
| ·统计学方法 | 第79-81页 |
| ·实验结果 | 第81-91页 |
| ·不同培养条件下问号钩体脂质A主要合成基因的表达差异 | 第81页 |
| ·不同pH对问号钩体脂质A主要合成基因的表达差异 | 第81-82页 |
| ·低pH EMJH培养基中生长的问号钩体的脂质A质谱图谱 | 第82-84页 |
| ·低pH EMJH培养基中生长的问号钩体的LPS含量 | 第84页 |
| ·LA1745等5个基因膜外部分PCR结果 | 第84-85页 |
| ·T-A克隆及亚克隆酶切鉴定结果 | 第85页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE | 第85页 |
| ·抗血清的蛋白质免疫印迹鉴定 | 第85-86页 |
| ·问号钩体被抗血清封闭后于低pH环境中脂质A主要合成基因的表达差异 | 第86-87页 |
| ·lpxD_1、lpxD_2、htrB、LA2222、LA2541和LA3996敲除菌株的PCR鉴定 | 第87页 |
| ·LA2222、LA2541和LA3996基因敲除问号钩体于低pH环境中lpxC、lpxD_1、lpxD_2及htrB的表达差异 | 第87-89页 |
| ·lpxD_1、lpxD_2和htrB基因敲除问号钩体脂质A的质谱检测图谱 | 第89-90页 |
| ·LA2222、LA2541和LA3996基因敲除问号钩体于低pH环境中脂质A结构 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-95页 |
| 第七章 结论 | 第95-96页 |
| 第八章 中国钩端螺旋体病流行病学研究 | 第96-105页 |
| ·中国的地理环境及气候特征 | 第97页 |
| ·中国钩体病的发现及流行概况 | 第97-98页 |
| ·主要发流行地区 | 第98-99页 |
| ·1991-2010年中国钩体病流行情况 | 第99页 |
| ·流行季节 | 第99-101页 |
| ·性别、年龄、和职业分布 | 第101页 |
| ·流行菌群及主要宿主动物 | 第101-102页 |
| ·影响钩端螺旋体病流行特征的因素 | 第102-103页 |
| ·钩体病的临床分型及地理分布 | 第103页 |
| ·我国钩体病的预防及监控 | 第103-104页 |
| ·结论与展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-124页 |
| 第九章 综述：问号钩端螺旋体及结核分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白Mce的研究进展 | 第124-134页 |
| 参考文献 | 第130-134页 |
| 附录： | 第134-139页 |
| Ⅰ主要仪器 | 第134-135页 |
| Ⅱ 主要试剂、耗材及来源 | 第135-136页 |
| Ⅲ 主要溶液及配制方法 | 第136-138页 |
| Ⅳ 问号钩体脂质A合成途径 | 第138-139页 |
| 作者简历与攻读学位期间取得的科研成果 | 第139页 |
