| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-36页 |
| ·冷诱导基因（cold regulated gene, COR） | 第20页 |
| ·植物转录因子 | 第20-23页 |
| ·植物转录因子的结构 | 第20-21页 |
| ·植物转录因子的分类 | 第21-23页 |
| ·CBF/DREB1 转录因子与植物抗逆性 | 第23-26页 |
| ·顺式作用元件 CRT/DRE 和 ABRE | 第23-24页 |
| ·CBF/DREB 转录因子的分离 | 第24-25页 |
| ·CBF/DREB1 改进植物的抗逆性及 CBF/DREB1 通路的保守性 | 第25-26页 |
| ·植物非生物胁迫信号转导途径 | 第26-28页 |
| ·CBF/DREB1 转录因子上游调控基因 ICE1 的分离鉴定 | 第28-30页 |
| ·植物抗寒基因工程中的外源基因选择 | 第30-31页 |
| ·水稻遗传转化过程中的启动子选择 | 第31-33页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| ·技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 LsICE1、BcICE1 和 RsICE1 基因的克隆与序列分析 | 第36-61页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| ·材料与方法 | 第37-42页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·克隆试剂与培养基 | 第37页 |
| ·引物设计与合成 | 第37页 |
| ·总 RNA 提取 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR | 第38-39页 |
| ·LsICE1 基因分离 | 第39页 |
| ·BcICE1 基因分离 | 第39-40页 |
| ·RsICE1 基因分离 | 第40页 |
| ·DNA 回收及纯化 | 第40页 |
| ·平末端 DNA 片段加 A 与 T-A 克隆 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备与热击转化 | 第41页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·序列分析 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-57页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·LsICE1 基因的 RT-PCR 和 SON-PCR 扩增 | 第43-45页 |
| ·BcICE1 基因的 RT-PCR 和 SON-PCR 扩增 | 第45-47页 |
| ·RsICE1 基因的电子克隆 | 第47-49页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的理化性质分析 | 第49-50页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的系统进化树的构建 | 第50页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的多序列比对 | 第50-51页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的二级结构分析 | 第51-53页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的疏水性分析 | 第53-54页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的磷酸化位点分析 | 第54页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的跨膜区分析 | 第54-56页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的保守结构域预测 | 第56页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 蛋白的固有无序化分析 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-61页 |
| 第三章 LsICE1、BcICE1 和 RsICE1 基因表达与转录激活分析 | 第61-76页 |
| 前言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-66页 |
| ·植物材料 | 第61-62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·引物设计与合成 | 第62页 |
| ·材料处理 | 第62-63页 |
| ·总 RNA 提取和 cDNA 第一链合成 | 第63页 |
| ·半定量 RT-PCR 反应分析基因表达模式 | 第63页 |
| ·质粒的小量提取 | 第63-64页 |
| ·双酶切和连接反应 | 第64页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因的原核表达 | 第65页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因转录激活载体构建 | 第65页 |
| ·菌种保藏 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-72页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因组织表达分析 | 第66页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因诱导表达分析 | 第66-67页 |
| ·LsICE1 基因的原核表达分析 | 第67-69页 |
| ·BcICE1 基因的原核表达分析 | 第69-70页 |
| ·RsICE1 基因的原核表达分析 | 第70-71页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因转录激活载体鉴定 | 第71-72页 |
| ·LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因转录激活验证 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-76页 |
| 第四章 农杆菌介导水稻转 LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因 | 第76-95页 |
| 前言 | 第76-77页 |
| ·材料与方法 | 第77-83页 |
| ·植物材料 | 第77页 |
| ·主要试剂与培养基 | 第77-78页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·农杆菌感受态的制备与电击转化 | 第79-80页 |
| ·水稻遗传转化 | 第80页 |
| ·转基因水稻 DNA 提取 | 第80-81页 |
| ·T_0代转基因水稻植株的 PCR 检测 | 第81页 |
| ·T_0代转基因水稻植株的 PCR-Southern 检测 | 第81-82页 |
| ·T_0代转基因水稻植株的 RT-PCR 检测 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-91页 |
| ·植物表达载体 pCAMBIA1301-Ubi-LsICE1-nos 的鉴定 | 第83-84页 |
| ·植物表达载体 pCAMBIA1301-Ubi-BcICE1-nos 的鉴定 | 第84-85页 |
| ·植物表达载体 pCAMBIA1301-Ubi-RsICE1-nos 的鉴定 | 第85-86页 |
| ·T_0代转基因水稻植株的获得 | 第86-87页 |
| ·T_0代转基因植株的 PCR 检测 | 第87-88页 |
| ·T_0代转基因植株的 PCR-Southern 分析 | 第88-89页 |
| ·T_0代转基因植株的 RT-PCR 检测 | 第89-91页 |
| ·T_0代转基因植株的主要农艺性状 | 第91页 |
| ·讨论 | 第91-95页 |
| 第五章 转 LsICE1、BcICE1、RsICE1 基因水稻的抗寒性效果评价 | 第95-113页 |
| 前言 | 第95-96页 |
| ·材料与方法 | 第96-99页 |
| ·植物材料 | 第96页 |
| ·主要试剂与引物 | 第96页 |
| ·T_1代转基因水稻潮霉素抗性分析 | 第96-97页 |
| ·低温恢复生长法测定转基因水稻的抗寒性 | 第97页 |
| ·转基因水稻相对电导率测定 | 第97页 |
| ·转基因水稻丙二醛含量测定 | 第97-98页 |
| ·转基因水稻游离脯氨酸含量测定 | 第98页 |
| ·T_1代转基因水稻株系 Southern blot 杂交 | 第98-99页 |
| ·T_1代转基因水稻株系 Nornthern blot 杂交 | 第99页 |
| ·T_1代转基因水稻冷反应基因表达分析 | 第99页 |
| ·结果与分析 | 第99-109页 |
| ·T_1代转基因水稻潮霉素抗性及遗传分析 | 第99-101页 |
| ·低温恢复生长法测定转基因植株存活率 | 第101-102页 |
| ·T_1代转基因水稻在低温胁迫下的相对电导率变化 | 第102-104页 |
| ·T_1代转基因水稻在低温胁迫下的丙二醛变化 | 第104-105页 |
| ·T_1代转基因水稻在低温胁迫下的脯氨酸变化 | 第105-106页 |
| ·T_1代转基因水稻株系 Southern blot 分析 | 第106-107页 |
| ·T_1代转基因水稻株系 Nornthern 分析 | 第107-108页 |
| ·T_1代转基因水稻冷反应基因表达分析 | 第108-109页 |
| ·讨论 | 第109-113页 |
| 参考文献 | 第113-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第127-128页 |
