| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-39页 |
| ·小RNA病毒概况 | 第11-21页 |
| ·小RNA病毒的分类学地位 | 第11页 |
| ·小RNA病毒的结构特征和化学组成 | 第11-13页 |
| ·小RNA病毒的复制 | 第13-16页 |
| ·小RNA病毒的翻译 | 第16-18页 |
| ·小RNA病毒的蛋白质加工 | 第18-20页 |
| ·昆虫小RNA样病毒 | 第20-21页 |
| ·传染性软化病病毒(IFV)研究进展 | 第21-30页 |
| ·软化病及其病原的研究历史 | 第21-22页 |
| ·IFV粒子的形态结构和理化特性 | 第22-23页 |
| ·IFV的基因组 | 第23-24页 |
| ·IFV的蛋白组 | 第24-27页 |
| ·IFV的病理学 | 第27-28页 |
| ·IFV的分类学地位 | 第28-29页 |
| ·IFV的检测手段 | 第29-30页 |
| ·RNA依赖性RNA聚合酶研究进展 | 第30-39页 |
| ·RdRp的分类和功能 | 第30-31页 |
| ·RdRp的整体结构 | 第31-32页 |
| ·RdRp的结构域 | 第32-34页 |
| ·RdRp的保守基序 | 第34-35页 |
| ·RdRp的催化机制 | 第35-37页 |
| ·RdRp在抗病毒治疗中的应用 | 第37-39页 |
| 第2章 IFV(桐乡株)的nested RT-PCR检测 | 第39-47页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·生物材料 | 第40页 |
| ·酶和试剂 | 第40页 |
| ·引物 | 第40页 |
| ·溶液 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·病毒的增殖 | 第40-41页 |
| ·病毒的纯化 | 第41-42页 |
| ·RNA模板的制备 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR | 第43-44页 |
| ·PCR产物测序及BLAST搜索 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-45页 |
| ·Nested RT-PCR结果 | 第44-45页 |
| ·BLAST搜索和序列分析 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第3章 IFV(桐乡株)RNA聚合酶的克隆及序列分析 | 第47-60页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·病毒 | 第48页 |
| ·载体和菌株 | 第48页 |
| ·引物 | 第48页 |
| ·酶和其他试剂 | 第48-49页 |
| ·溶液和培养基 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-54页 |
| ·病毒RNA的抽提 | 第49页 |
| ·反转录 | 第49页 |
| ·PCR扩增RdRp | 第49-50页 |
| ·扩增片段的回收 | 第50页 |
| ·连接 | 第50-51页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| ·转化 | 第52页 |
| ·抽提质粒DNA | 第52-53页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第53页 |
| ·质粒的序列测定 | 第53页 |
| ·序列分析和进化树的构建 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·RdRp的RT-PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第55页 |
| ·RdRp序列的测定和分析 | 第55-56页 |
| ·RdRp多重序列对比 | 第56-57页 |
| ·系统发育树的构建 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第4章 IFV RdRp在杆状病毒表达系统中的表达 | 第60-72页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·质粒、菌种和细胞 | 第61页 |
| ·引物 | 第61页 |
| ·酶和其他试剂 | 第61-62页 |
| ·溶液和培养基 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-68页 |
| ·RdRp片段的扩增和回收 | 第62页 |
| ·供体质粒的构建 | 第62-64页 |
| ·重组供体质粒的鉴定和测序 | 第64页 |
| ·转座 | 第64-65页 |
| ·重组Bacmid的分离 | 第65-66页 |
| ·重组Bacmid的鉴定 | 第66页 |
| ·重组Bacmid转染BmN细胞 | 第66页 |
| ·重组杆状病毒的收集和增殖 | 第66-67页 |
| ·蛋白表达和蛋白样品的制备 | 第67页 |
| ·蛋白样品的SDS-PAGE | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-70页 |
| ·RdRp片段的扩增 | 第68页 |
| ·重组供体质粒的鉴定 | 第68页 |
| ·重组质粒部分序列的测定 | 第68-69页 |
| ·重组Bacmid的鉴定 | 第69-70页 |
| ·蛋白样品的SDS-PAGE | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 结论和展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 附录A 常用缓冲液和培养基 | 第84-90页 |
| 附录B 缩略词 | 第90-91页 |
| 附录C Bac-to-Bac系统工作原理 | 第91-92页 |
| Writings&Sequences | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
