| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-12页 |
| 2 材料和方法 | 第12-24页 |
| ·菌种 | 第12页 |
| ·供试培养基 | 第12页 |
| ·供试药品及主要试剂 | 第12页 |
| ·主要仪器 | 第12-13页 |
| ·灰葡萄孢钙调磷酸酶基因β亚基(CNB)的克隆 | 第13-16页 |
| ·引物设计 | 第13页 |
| ·灰霉基因组DNA及总RNA的提取(采用SDS-CTAB法) | 第13-14页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第14页 |
| ·病菌CNB基因cDNA同源片段的获得 | 第14-15页 |
| ·DNA片段的纯化 | 第15页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接 | 第15页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第15-16页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第16页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第16页 |
| ·基因全长的获得 | 第16-17页 |
| ·生物信息学分析特异引物设计 | 第16-17页 |
| ·扩增CNB基因全长的特异引物设计 | 第17页 |
| ·CNB基因全长cDNA的获得 | 第17页 |
| ·基因DNA全长及上游调控序列的获得和基因结构分析 | 第17-19页 |
| ·基因DNA全长的获得 | 第17-18页 |
| ·Genome walking技术获得CNB基因上游DNA序列 | 第18-19页 |
| ·CNB基因的结构分析 | 第19页 |
| ·基因的拷贝数分析 | 第19-20页 |
| ·探针制备 | 第19页 |
| ·限制性酶酶切 | 第19-20页 |
| ·电转移 | 第20页 |
| ·Southern杂交 | 第20页 |
| ·正反义表达载体的构建 | 第20-24页 |
| ·CNB基因引物的设计 | 第20-21页 |
| ·CNB基因ORF的扩增 | 第21页 |
| ·pSOⅠ质粒的酶切验证 | 第21-22页 |
| ·CNB基因正反以表达载体的构建 | 第22-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-37页 |
| ·基因组DNA和总RNA的提取及cDNA的合成 | 第24页 |
| ·CNB基因同源片段的获得 | 第24-26页 |
| ·基因简并引物的设计 | 第24页 |
| ·灰霉病菌CNB同源基因片段基因组cDNA扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆、测序和生物信息学分析 | 第25-26页 |
| ·CNB基因cDNA和DNA全序列的获得 | 第26-28页 |
| ·扩增CNB基因的cDNA和DNA全长引物的设计 | 第26页 |
| ·CNB基因的cDNA和DNA全长扩增 | 第26页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆、测序和生物信息学分析 | 第26-28页 |
| ·CNB基因的生物信息学分析 | 第28-33页 |
| ·CNB基因序列的分析 | 第28-30页 |
| ·CNB基因的蛋白分析 | 第30-31页 |
| ·CNB基因5'上游序列的克隆与生物信息学分析 | 第31-33页 |
| ·Southern杂交 | 第33-34页 |
| ·探针的制备 | 第33-34页 |
| ·Southern杂交 | 第34页 |
| ·正义、反义诱导表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·灰霉钙调磷酸酶基因的诱导表达载体构建策略。 | 第34-35页 |
| ·CNB基因引物的设计 | 第35页 |
| ·CNB基因的ORF扩增 | 第35页 |
| ·正义反义诱导表达载体的验证 | 第35-36页 |
| ·新构建载体的保存 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-41页 |
| ·利用保守性核苷酸序列进行同源基因克隆 | 第37页 |
| ·生物信息学技术获得基因cDNA全长 | 第37-38页 |
| ·Genome walking技术获得已知基因片段的侧翼序列 | 第38页 |
| ·CNB的结构域及可能功能 | 第38-39页 |
| ·CNB基因及启动子的可能功能分析 | 第39-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第48-49页 |
| 作者简历 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-53页 |
