提要 | 第1-5页 |
英文缩略词表 | 第5-9页 |
引言 | 第9-11页 |
第一章 文献回顾 | 第11-19页 |
一、白细胞介素家族 | 第11-12页 |
二、IL-10 生物学特性 | 第12-14页 |
三、IL-10 生物学功能 | 第14-16页 |
四、IL-10 与免疫抑制 | 第16-19页 |
第二章 实验研究 | 第19-64页 |
第一节 hIL-10 基因克隆及真核表达载体pcDNA3.0-hIL-10 的构建 | 第19-36页 |
一、实验材料 | 第19-22页 |
1. 主要试剂 | 第19-20页 |
2. 主要仪器设备 | 第20页 |
3. 主要试剂的配制 | 第20-22页 |
二、实验方法 | 第22-29页 |
1. hIL-10 特异性 PCR 引物设计与合成 | 第22页 |
2. 正常人外周血单个核细胞(PBMC)的分离培养与活化 | 第22-24页 |
3. hIL-10 基因的PCR 扩增 | 第24-25页 |
4. hIL-10 基因片段的 TA 克隆 | 第25-28页 |
5. 真核表达载体pcDNA3.0-hIL-10 重组基因的构建 | 第28-29页 |
6. pcDNA3.0-hIL-10 重组基因的纯化 | 第29页 |
三、实验结果 | 第29-36页 |
1. RT‐PCR 法获得人 IL-10 基因片段 | 第29-30页 |
2. pMD18-T-hIL-10 重组基因的鉴定 | 第30-33页 |
3. 真核表达载体pcDNA3.0-hIL-10 重组基因的鉴定 | 第33-36页 |
4. pcDNA3.0-hIL-10 重组基因的纯化 | 第36页 |
第二节 重组基因pcDNA3.0-hIL-10 瞬时转染HEK293 细胞介导的免疫学效应 | 第36-57页 |
一、实验材料 | 第36-38页 |
1 细胞株与病毒 | 第36页 |
2. 主要试剂 | 第36-37页 |
3. 主要仪器 | 第37页 |
4. 主要试剂的配制 | 第37-38页 |
二、实验方法 | 第38-46页 |
1. 检测细胞内表达的 IL-10 特异性 PCR 引物设计与合成 | 第38页 |
2. 逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测不同细胞株中1L-10 表达 | 第38-40页 |
3. 重组基因pcDNA3.0-hIL-10 瞬时转染人胚肾细胞 HEK293 | 第40-43页 |
4. 重组基因pcDNA3.0-hIL-10 瞬时转染对 HEK293 细胞免疫学行为的影响 | 第43-46页 |
5. 统计学方法 | 第46页 |
三、实验结果 | 第46-57页 |
1. 转染细胞的选择 | 第46-47页 |
2. pcDNA3.0- hIL–10 瞬时转染 HEK293 细胞的情况 | 第47-50页 |
3. pcDNA3.0-hIL-10 瞬时转染对HEK293 细胞免疫学行为的影响 | 第50-57页 |
讨论 | 第57-63页 |
小结 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-71页 |
中文摘要 | 第71-74页 |
Abstract | 第74-77页 |
致谢 | 第77-78页 |
攻读硕士期间已(待)发表的文章 | 第78页 |