| 目录 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-42页 |
| 1 昆虫中的转座子 | 第16-29页 |
| ·转座子的分类及其在昆虫中的分布 | 第16-26页 |
| ·RNA转座子 | 第22-24页 |
| ·长末端重复反转录转座子 | 第22-23页 |
| ·非长末端重复反转录转座子 | 第23页 |
| ·短散布因子 | 第23-24页 |
| ·DNA转座子 | 第24-26页 |
| ·剪切和粘贴的DNA转座子 | 第24-25页 |
| ·袖珍反向重复转座子 | 第25-26页 |
| ·滚圈式DNA转座子 | 第26页 |
| ·昆虫转座子的进化 | 第26-27页 |
| ·昆虫转座子的应用 | 第27-29页 |
| ·昆虫的内源转座子和遗传转化 | 第27-28页 |
| ·SINE插入位点的多样性作为遗传标记 | 第28页 |
| ·SINE插入作为进化标记 | 第28-29页 |
| 2 用于转基因昆虫的转座子 | 第29-40页 |
| ·P因子 | 第29-31页 |
| ·P因子的结构 | 第29-30页 |
| ·P因子的转座机制 | 第30页 |
| ·P因子引起的杂种败育 | 第30页 |
| ·P因子的种群生物学 | 第30-31页 |
| ·P因子在转基因昆虫中的应用 | 第31页 |
| ·hobo,(hAT)转座子家族 | 第31-33页 |
| ·hobo,(hAT)转座子简介 | 第31-32页 |
| ·hobo,(hAT)转座子在转基因昆虫中的应用 | 第32-33页 |
| ·Minis | 第33页 |
| ·Minos简介 | 第33页 |
| ·Minos在转基因昆虫中的应用 | 第33页 |
| ·mariner | 第33-35页 |
| ·mariner简介 | 第33-34页 |
| ·mariner在转基因昆虫中的应用 | 第34-35页 |
| ·piggyBac | 第35-40页 |
| ·piggyBac的发现及其它TTAA转座子 | 第35页 |
| ·piggyBac的结构特征和转座机制 | 第35页 |
| ·piggyBac的转座活性调查 | 第35-36页 |
| ·报告基因系统 | 第36-37页 |
| ·piggyBac在转基因生物中的应用 | 第37页 |
| ·piggyBac的分布 | 第37-40页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第40-42页 |
| 第二章 甜菜夜蛾piggyBac类似因子的基因克隆与序列分析 | 第42-60页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·试虫 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-52页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第45-46页 |
| ·试剂准备 | 第45页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·环状DNA模板的制备 | 第46-47页 |
| ·基因组DNA的消化 | 第46页 |
| ·基因组DNA的环化 | 第46-47页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·克隆DNA片段用兼并引物 | 第47页 |
| ·Inverse PCR引物 | 第47页 |
| ·甜菜夜蛾piggyBac类似因子DNA片段的PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·PCR反应体系 | 第47-48页 |
| ·PCR反应条件 | 第48页 |
| ·甜菜夜蛾piggyBac类似因子全基因的Inverse PCR克隆 | 第48-49页 |
| ·PCR反应体系 | 第48页 |
| ·PCR反应程序 | 第48-49页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第49页 |
| ·感受态大肠杆菌细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·连接反应及连接产物的转化 | 第50-51页 |
| ·连接反应 | 第50页 |
| ·转化 | 第50-51页 |
| ·单克隆的挑选及扩大培养 | 第51页 |
| ·转化产物检测 | 第51页 |
| ·质粒酶切 | 第51页 |
| ·PCR检测 | 第51页 |
| ·序列测定 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-57页 |
| ·甜菜夜蛾piggyBac类似因子基因片段的克隆 | 第52页 |
| ·与其它昆虫piggyBac类似因子的同源性分析 | 第52-53页 |
| ·Inverse PCR获得的甜菜夜蛾piggyBac类似因子的DNA序列 | 第53-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 第三章 棉铃虫piggyBac类似因子基因的克隆与序列分析 | 第60-87页 |
| 1 材料与方法 | 第61-70页 |
| ·验材料 | 第61-62页 |
| ·试虫 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-70页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第62页 |
| ·环状DNA模板的制备 | 第62-63页 |
| ·棉铃虫piggyBac类似因子基因DNA片段的PCR扩增 | 第63-64页 |
| ·引物设计 | 第63页 |
| ·PCR反应体系 | 第63-64页 |
| ·PCR反应条件 | 第64页 |
| ·棉铃虫piggyBac类似因子HaPLE1全序列的PCR扩增 | 第64-66页 |
| ·引物设计 | 第64-65页 |
| ·PCR反应体系 | 第65页 |
| ·PCR反应条件 | 第65-66页 |
| ·Vectorret PCR克隆棉铃虫内源piggyBac类似因子在基因组上的旁侧序列 | 第66-69页 |
| ·Vectorret PCR接头序列设计 | 第66页 |
| ·Vectorret PCR模板制备 | 第66-67页 |
| ·Vectorret PCR引物设计 | 第67-68页 |
| ·Vectorret PCR反应体系 | 第68页 |
| ·Vectorret PCR反应条件 | 第68-69页 |
| ·棉铃虫piggyBac类似因子HaPLE2全序列的PCR扩增 | 第69-70页 |
| ·Flanking PCR引物设计 | 第69-70页 |
| ·PCR反应体系 | 第70页 |
| ·PCR反应条件 | 第70页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第70页 |
| ·连接反应及连接产物的转化 | 第70页 |
| ·序列测定 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-78页 |
| ·棉铃虫piggyBac类似因子DNA片段的克隆 | 第71页 |
| ·棉铃虫内源piggyBac类似因子HaPLE1的全序列 | 第71-73页 |
| ·piggyBac类似因子的旁侧序列 | 第73-75页 |
| ·棉铃虫piggyBac类似因子HaPLE2的全序列 | 第75-76页 |
| ·棉铃虫两个piggyBac类似因子HaPLE1和HaPLE2的序列比较分析 | 第76-77页 |
| ·棉铃虫piggyBac类似因子的ITR与其他昆虫piggyBac类似因子的ITR序列的比较 | 第77-78页 |
| ·棉铃虫内源piggyBac类似因子HaPLE1与其它昆虫piggyBac类似因子的氨基酸序列比对 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-87页 |
| 第四章 HaPLE1和HaPLE2在棉铃虫不同地理品系中的分布 | 第87-92页 |
| 1 材料与方法 | 第87-89页 |
| ·实验材料 | 第87-88页 |
| ·供试棉铃虫 | 第87-88页 |
| ·主要试剂 | 第88页 |
| ·主要仪器 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-89页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第88页 |
| ·引物设计 | 第88-89页 |
| ·PCR反应体系 | 第89页 |
| ·PCR反应条件 | 第89页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第89页 |
| ·连接反应及连接产物的转化 | 第89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 第五章 piggyBac转庄子基因的系统进化分析 | 第92-97页 |
| 1 材料与方法 | 第92-94页 |
| ·piggyBac因子的氨基酸序列 | 第93-94页 |
| ·piggyBac转座子系统进化树的构建 | 第94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-95页 |
| 3 讨论 | 第95-97页 |
| 第六章 棉铃虫piggyBac构建的载体在果蝇卵中的转座活性研究 | 第97-109页 |
| 1 材料与方法 | 第98-105页 |
| ·实验材料 | 第98-99页 |
| ·实验用载体 | 第98页 |
| ·试虫 | 第98页 |
| ·主要试剂 | 第98页 |
| ·主要仪器 | 第98-99页 |
| ·实验方法 | 第99-105页 |
| ·载体构建 | 第99-101页 |
| ·引物设计 | 第99页 |
| ·PCR反应体系 | 第99页 |
| ·PCR反应条件 | 第99-100页 |
| ·PCR产物回收 | 第100页 |
| ·酶切 | 第100页 |
| ·回收 | 第100-101页 |
| ·连接 | 第101页 |
| ·回收 | 第101页 |
| ·转化测序 | 第101页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第101页 |
| ·果蝇卵的收集与处理 | 第101-102页 |
| ·果蝇卵的转化 | 第102页 |
| ·果蝇卵中质粒DNA的提取 | 第102-103页 |
| ·试剂准备 | 第102页 |
| ·质粒提取步骤 | 第102-103页 |
| ·质粒的转化 | 第103-104页 |
| ·质粒的酶切 | 第103页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第103-104页 |
| ·电击转化过程 | 第104页 |
| ·质粒提取 | 第104页 |
| ·测序 | 第104-105页 |
| 2 结果与分析 | 第105-108页 |
| ·载体p3E1.2-CBW-1和p3E1.2-CBW-2的构建 | 第105-106页 |
| ·载体p3E1.2-CBW-1的活性调查 | 第106-107页 |
| ·发生了剪切的载体的序列分析 | 第107-108页 |
| 3 讨论 | 第108-109页 |
| 全文总结 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-132页 |
| 附录:攻读学位期间发表的学术论文 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
