| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第1章 引言 | 第8-14页 |
| ·核糖体简介 | 第8-9页 |
| ·真核生物核糖体的形成 | 第9-10页 |
| ·酵母中pre-rRNAs的成熟 | 第10-12页 |
| ·核糖体蛋白在rRNA的剪切成熟和核糖体功能中扮演的角色 | 第12页 |
| ·本课题研究内容、研究目标及意义 | 第12-14页 |
| 第2章 材料与方法 | 第14-31页 |
| ·实验材料 | 第14-18页 |
| ·质粒及菌种 | 第14页 |
| ·酶及化学试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器设备 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15-18页 |
| ·实验方法 | 第18-31页 |
| ·提取酵母基因组DNA | 第18-19页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第19-23页 |
| ·DH5a、ER2925、XL1-Blue感受态细胞的制备与转化 | 第23-24页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·利用同源重组构建RPL36内源基因缺失的突变酵母菌种 | 第25-28页 |
| ·在体外构建RPL36基因点突变 | 第28-29页 |
| ·Plasmid shuffling | 第29-30页 |
| ·Spotting assay | 第30-31页 |
| 第3章 结果与分析 | 第31-40页 |
| ·构建RPL36A或RPL36B基因删除片段 | 第31-33页 |
| ·RPL36A基因删除片段的构建 | 第31-32页 |
| ·RPL36B基因删除片段的构建 | 第32-33页 |
| ·构建并筛选基因组中内源RPL36基因缺失的突变酵母菌种，并用菌落PCR验证 | 第33-35页 |
| ·敲除酵母基因组中内源RPL36A或RPL36B基因 | 第33-34页 |
| ·敲除内源RPL36A或RPL36B基因缺失菌株中的剩下的RPL36B或RPL36A基因 | 第34-35页 |
| ·应用ClustalW软件分析比对不同物种间RPL36蛋白的保守氨基酸位点 | 第35-36页 |
| ·(HA)_3标签的野生型RPL36B基因的构建 | 第36-37页 |
| ·RPL36基因保守氨基酸位点的突变 | 第37-38页 |
| ·利用spotting assay方法检测RPL36蛋白的突变对细胞生长的影响 | 第38-40页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第40-43页 |
| ·酵母基因敲除的思考 | 第40-41页 |
| ·核糖体蛋白RPL36突变影响细胞生长机理的分析 | 第41-42页 |
| ·对今后工作的展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 附录 | 第47-50页 |
