| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 第一章 林麝γ-干扰素基因的克隆与分析 | 第12-25页 |
| 摘要 | 第12页 |
| 1 引言 | 第12页 |
| 2 材料与方法 | 第12-16页 |
| ·材料 | 第13页 |
| ·林麝外周血 | 第13页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| ·方法 | 第13-16页 |
| ·林麝外周血淋巴细胞分离和RNA提取 | 第13-14页 |
| ·林麝淋巴细胞IFN-γ的RT-PCR | 第14页 |
| ·cDNA片段的回收 | 第14-15页 |
| ·cDNA片段与pMD18-T载体的连接 | 第15页 |
| ·感受态细胞E.coli JM109的制备 | 第15页 |
| ·连接产物对大肠杆菌JM109的转化 | 第15页 |
| ·菌落PCR鉴定及测序 | 第15-16页 |
| ·测序结果及偶蹄目动物序列比对、相似性比较和系统进化分析 | 第16页 |
| 3 结果 | 第16-21页 |
| ·林麝淋巴细胞IFN-γ基因的RT-PCR | 第16-17页 |
| ·林麝IFN-γcDNA片段序列分析 | 第17页 |
| ·偶蹄目动物序列比对、相似性比较和系统进化分析 | 第17-21页 |
| 4 讨论 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-25页 |
| 第二章 林麝γ-干扰素基因在大肠杆菌中的表达 | 第25-36页 |
| 摘要 | 第25页 |
| 1 引言 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-30页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·菌落PCR扩增林麝IFN-γ编码区成熟肽序列 | 第27页 |
| ·菌落PCR产物回收 | 第27页 |
| ·扩增片段克隆到pGEX-4T-1载体中 | 第27-28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第29页 |
| ·林麝IFN-γ的诱导表达 | 第29页 |
| ·林麝IFN-γ原核表达产物的纯化 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-32页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·林麝IFN-γ在E.coli BL21中的诱导表达和纯化 | 第31-32页 |
| 4.讨论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-36页 |
| 第三章 林麝γ-干扰素基因在毕赤酵母中的表达 | 第36-52页 |
| 摘要 | 第36页 |
| 1 引言 | 第36页 |
| 2 材料方法 | 第36-42页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第37页 |
| ·主要溶液 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第38-40页 |
| ·重组质粒对酵母GS115的转化 | 第40-41页 |
| ·阳性转化子的抗性筛选和鉴定 | 第41页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·重组酵母的RT-PCR | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·真核表达载体转化酵母GS115,阳性克隆筛选 | 第43页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·反转录 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| ·表达载体的选择与构建 | 第45-47页 |
| ·外源基因MB_IFN-γ在巴斯德毕赤酵母中的整合方式 | 第47页 |
| ·发酵条件对外源基因MB_IFN-γ表达的影响 | 第47页 |
| ·外源基因自身的影响 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| [综述] 干扰素-γ研究进展 | 第52-68页 |
| 在读期间发表论文 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
