铝诱导的酵母细胞程序性死亡及其信号调控研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-40页 |
| 1 细胞程序性死亡/细胞凋亡概述 | 第11-24页 |
| ·动物细胞凋亡 | 第11-12页 |
| ·凋亡调控途径 | 第12-15页 |
| ·线粒体途径 | 第13页 |
| ·死亡受体途径 | 第13-14页 |
| ·内质网途径 | 第14-15页 |
| ·凋亡抑制基因 | 第15-19页 |
| ·Bcl-2 | 第15-16页 |
| ·Ced-9 | 第16-17页 |
| ·BI-1 | 第17-19页 |
| ·植物细胞程序性死亡 | 第19-22页 |
| ·酵母细胞程序性死亡 | 第22-24页 |
| 2 铝毒和耐铝机制概述 | 第24-27页 |
| ·植物中的研究 | 第24-25页 |
| ·酵母中的研究 | 第25-26页 |
| ·铝诱导细胞程序性死亡 | 第26-27页 |
| 3 冷诱导细胞程序性死亡 | 第27-30页 |
| ·动物中的研究 | 第27-29页 |
| ·冷藏概述 | 第27-28页 |
| ·主要特征 | 第28页 |
| ·信号转导通路 | 第28-29页 |
| ·凋亡阻断方法 | 第29页 |
| ·植物和酵母中的研究 | 第29-30页 |
| 4 钙信号转导研究进展 | 第30-40页 |
| ·细胞凋亡的钙信号 | 第30-37页 |
| ·胞内钙动态分布 | 第31-32页 |
| ·内质网钙信号 | 第32-33页 |
| ·线粒体钙信号 | 第33-34页 |
| ·细胞核钙信号 | 第34-35页 |
| ·研究趋势 | 第35-37页 |
| ·植物铝诱导的钙信号 | 第37-38页 |
| ·酵母钙信号转导 | 第38-40页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第40-58页 |
| 1 实验材料 | 第40-41页 |
| ·质粒 | 第40-41页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-58页 |
| ·分子克隆方法 | 第41-47页 |
| ·质粒小提 | 第41-42页 |
| ·DNA电泳 | 第42页 |
| ·DNA酶切 | 第42页 |
| ·载体脱磷 | 第42-43页 |
| ·DNA片段回收 | 第43页 |
| ·DNA连接 | 第43页 |
| ·PCR及引物设计 | 第43-45页 |
| ·感受态细胞制备 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第46页 |
| ·农杆菌转化 | 第46-47页 |
| ·菌种保存 | 第47页 |
| ·RACE法基因克隆 | 第47-49页 |
| ·基因表达分析 | 第49-51页 |
| ·半定量RT-PCR | 第49页 |
| ·Western Blotting | 第49-51页 |
| ·酵母实验方法 | 第51-54页 |
| ·质粒转化 | 第51-52页 |
| ·总DNA提取 | 第52页 |
| ·蛋白抽提 | 第52页 |
| ·平板点样 | 第52-53页 |
| ·细胞存活率测定 | 第53页 |
| ·生长曲线测定 | 第53-54页 |
| ·凋亡检测 | 第54-55页 |
| ·DAPI法 | 第54页 |
| ·TUNEL法 | 第54页 |
| ·透射电镜样本制备 | 第54页 |
| ·扫描电镜样本制备 | 第54-55页 |
| ·流式细胞术 | 第55-56页 |
| ·原理和方法 | 第55页 |
| ·测膜透性和DNA含量 | 第55页 |
| ·测ROS水平 | 第55页 |
| ·测Ca~(2+)水平 | 第55-56页 |
| ·拟南芥实验方法 | 第56-58页 |
| ·培养条件 | 第56页 |
| ·转基因方法 | 第56页 |
| ·拟南芥DNA提取 | 第56-57页 |
| ·拟南芥RNA提取 | 第57-58页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第58-92页 |
| 1 早竹BI-1基因的克隆 | 第58-62页 |
| ·3’和5’端cDNA序列 | 第58-59页 |
| ·真实的开放阅读框 | 第59-60页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第60-62页 |
| 2 基因表达载体构建 | 第62-67页 |
| ·酵母表达载体 | 第62-66页 |
| ·植物表达载体 | 第66-67页 |
| 3 酵母转基因和表达产物 | 第67-72页 |
| ·酵母转基因鉴定 | 第67-68页 |
| ·表达产物分析 | 第68-69页 |
| ·PpBI-1胞内定位 | 第69-70页 |
| ·Bax和PpBI-1基本功能 | 第70-72页 |
| 4 铝毒效应和基因的耐铝功能 | 第72-83页 |
| ·缓解铝引起的生长抑制 | 第72-74页 |
| ·铝促进细胞分裂 | 第74-76页 |
| ·缓解铝引起的细胞死亡 | 第76-78页 |
| ·铝诱导的凋亡特征 | 第78-79页 |
| ·铝毒的信号调控 | 第79-83页 |
| ·胞内ROS水平 | 第80-81页 |
| ·胞内Ca~(2+)水平 | 第81-83页 |
| 5 冷胁迫效应和基因功能 | 第83-85页 |
| ·冷胁迫敏感性 | 第83页 |
| ·冷胁迫诱导的凋亡特征 | 第83-84页 |
| ·GSH和PpBI-1的耐冷作用 | 第84-85页 |
| ·ROS和Ca~(2+)水平 | 第85页 |
| 6 酵母铝毒钙信号机制的初步研究 | 第85-88页 |
| ·钙通道突变体的基本特性 | 第85-87页 |
| ·钙通道突变体的铝敏感性 | 第87-88页 |
| 7 拟南芥转基因和表达 | 第88-92页 |
| ·转基因纯合系 | 第89-91页 |
| ·基因组PCR鉴定 | 第91页 |
| ·RT-PCR检测 | 第91-92页 |
| 第四章 展望 | 第92-96页 |
| 参考文献 | 第96-114页 |
| 在读期间发表的论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
